3 讨 论
传统的淋菌培养鉴定及药敏试验至少需48～72 h ,周期长、步骤复杂,而且受标本采集、运送、培养阳性率低等影响,此外,药敏试验还受培养基、抗生素纸片、细菌接种量及细菌存活等因素影响,导致药敏判断误差。而PCR 法具敏感、特异、迅速、标本不受淋菌存活的影响等优点,已在临床广泛应用。目前,国内有报道用多重PCR2核酸探针杂交技术、荧光定量聚合酶链法同时检测淋菌、解脲脲支原体、沙眼衣原体等多种病原体4 ,5 ,也有用PCR 方法检测淋菌或青霉素、四环素耐药性的报道,其所采用的PCR 技术一般都为单对引物,不同扩增体系,尚无在同一扩增体系内同时检测淋菌及青霉素、四环素耐药基因的报道。我们根据淋菌CPPB 基因、耐青霉素的TeM21 基因、耐四环素的Tet2M 基因分别设计了3对引物在同一扩增体系内扩增,根据扩增的条带即
可确定是否为淋菌感染,同时又为青霉素、四环素耐药,通过对淋菌标准菌株、临床分离的PPNG、TRNG株测定,在150 bp 、224 bp 、336 bp 各有阳性带出现,将临床收集的125 例泌尿生殖道标本同时进行传统的培养药敏和PCR ,由表1 可知多重PCR 法检测淋菌及青霉素、四环素的阳性率均高于传统的培养法和药敏法。
从理论上讲,同时具有青霉素、四环素耐药性的其他菌的耐药质粒会有交叉反应,但我们测定了大肠埃希菌、痢疾志贺菌PPNG、TRNG株,结果224 bp 、336 bp 均无阳性扩增带出现,这与国内外的报道一致3 ,6 ,但与淋菌耐药质粒序列最相似的是副流感嗜血菌,其耐药质粒是否会有交叉反应,还需进一步研究证实。
本研究采用在同一扩增体系同时检测淋菌及青霉素、四环素耐药性,不受传统方法诸多因素影响,在2～3 h 内即可同时诊断是否有淋菌感染以及对青霉素、四环素是否敏感,该法灵敏度高、特异性强,无论是对临床快速诊断治疗淋病,还是对淋菌的耐药性监测和流行病学调查,都可提供一种简便、快速、可靠的方法,如制成检测试剂盒,并通过进一步的验证,可在临床广泛使用。
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