一、实验目的：
1、学习凝胶柱层析技术的原理及操作方法；
2、学习血红蛋白的制备方法。

二、实验原理:
1.凝胶层析：原理与应用
2.本实验反应原理：血红蛋白（hemoglobin，Hb）是红细胞的主要内含物，它是血红素和珠蛋白肽链联接而成的一种结合蛋白，属色素蛋白。血红蛋白(Mw＝64 500)中加入过量的高铁氰化钾(K3Fe(CN)6，Mw＝327.25)，血红蛋白与高铁氰化钾反应生成高铁血红蛋白(MetHb)。为了除去多余的高铁氰化钾，得到较纯的MetHb样品，将上述混合物通过交联葡聚糖凝胶柱，用磷酸缓冲液洗脱，从颜色的不同，可直接观察到MetHb(红褐色)洗脱较快，而小分子高铁氰化钾(黄色)洗脱较慢，达到将MetHb完全分离出来的目的。

二、实验材料、试剂和仪器:
(一)材料：鸡的抗凝全血
(二)试剂：
1．四氯化碳(CCl₄)
2．生理盐水
3．交联葡聚糖G-25(细粒)
4．0.1mol/L磷酸缓冲液(pH7.0)：
a、0.1M磷酸二氢钠；b、0.1M磷酸氢二钠；
a、b以49:51的比例混合，并用pH计校对
5．0.4% K3Fe(CN)6。
6. 冷生理盐水
(三)仪器(略)

三、实验步骤：
1．凝胶的处理：
取4克Sephadex-G25干粉，浸泡于蒸馏水中充分溶胀（室温，6小时），然后倾斜法除去表面悬浮的小颗粒，最后加入等体积pH7磷酸缓冲液继续浸泡。

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