肠道杆菌的鉴定（三）
实验内容：
1. 观察双糖铁培养基上细菌的生化反应情况
肠道致病菌： 斜面红色， 底层黄色 ，若形成硫化氢，培养基变黑。
肠道非致病菌： 斜面黄色， 底层黄色，可能有气泡。
原理：培养基的指示剂为酚红，酸性时呈黄色，碱性时呈红色。发酵乳糖的细菌使斜面和底层均呈黄色，可有气泡产生；若只发酵葡萄糖，则因葡萄糖含量少，生成少量的酸可因接触空气而氧化挥发，并因细菌生长繁殖利用含氮物质生成碱性化合物，使斜面呈红色，底层由于缺氧，细菌发酵葡萄糖生成酸类物质不氧化而保持黄色；如细菌分解蛋白质中的胱氨酸产生硫化氢，则与硫酸亚铁作用生成黑色的硫化亚铁沉淀，使培养基变黑。
2.观察半固体培养基上的细菌生长现象
若细菌沿穿刺线生长，穿刺线周围的培养基清晰，则细菌没有动力（即无鞭毛）；若细菌沿穿刺线向周围扩散生长，穿刺线周围的培养基呈云雾状混浊，表明细菌有动力（即有鞭毛）。
结合革兰氏染色结果、SS平板的培养结果、双糖铁培养结果、半固体培养结果作出初步诊断。
3. 血清学鉴定——玻片凝集试验（鉴定菌种）
目的 观察细菌在玻片上与其相应抗体结合所出现的细菌凝集现象，理解抗原抗体反应的特异性。
原理 将已知细菌抗体与待测细菌混合，如果抗原与抗体相对应，则引起细菌凝集，反之则不凝集，据其凝集现象可判断细菌种类。
材料 1、 1：20痢疾杆菌免疫血清，1：20伤寒杆菌免疫血清。
2、 待检菌培养物。
3、 生理盐水、玻片、记号笔、接种环、酒精灯、消毒缸等。
方法 1、 取洁净玻片1张，用记号笔划分三等份，如下图所示：
2、 用接种环分别取生理盐水、1：20伤寒杆菌免疫血清、1：20痢疾杆菌免疫血清各3-4环按图示位置放在玻片上，注意在换取另一种血清时要烧灼接种环，以免混淆血清产生错误结果。
3、 用接种环挑取少量待检菌加入玻片的生理盐水中，充分混匀，再挑取少量待检菌加人1:20伤寒免疫血清中混匀，同法挑取待检菌加入1：20痢疾杆菌免疫血清中，混匀。注意无菌操作。
4、 轻摇动玻片，1—2分钟后观察
结果观察
阳性：液体变清，并有乳白色凝集块出现。
阴性：液体仍然混浊，，无凝集块出现。
记录结果之后，将玻片放入含消毒液的指定容器内，切勿任意放置或冲洗。
注意 取细菌培养物时不宜过多，与免疫血清混合时，必须将细菌涂散、涂均匀，但不宜将面积涂得过大，以免很快干涸而影响结果观察。
4. 细菌代谢产物的观察
观察细菌在培养基中的生长情况，参照前表（肠道杆菌生物学性状）分析并作出初步鉴定，依照此结果，再用其他生化反应来作最后鉴定。
