2. 肠道致病菌的分离鉴定(一)
(1)介绍肠道致病菌的分离鉴定程序(图7-2)
(2)分离培养与鉴定具体方法
①取材:挑取黏液脓血样粪便置清洁容器内立即送检。若不能及时送检,应用甘油缓冲盐水保存。若无法获取粪便时,用肛拭子检查(用无菌棉拭子经生理盐水湿润后,插入肛门4~5cm处轻轻沿肛壁擦拭一圈后取出,放入含少量甘油缓冲盐水的无菌试管中送检。
②粪便标本或肛拭子可直接在SS琼脂平板上划线分离培养(常用三区划线法,详见实验五 细菌的分离与培养)。
对血、骨髓、尿等标本可先做增菌培养,然后取增菌培养物在上述平板上划线分离,经37℃培养18~24小时。
2.SS平板分离培养(方法同前)
三区划线时注意:无菌操作; 划线角度准确,轻而快; 分区合理; 接种环适时处理;培养基正确放置,作好标记.。
附. 有关培养基及试剂的配制:
(1)肉汤培养基:新鲜肉浸液1000ml、蛋白胨10mg、氯化钠5g,上述各成分混合后调PH7.2~7.4,分装于100ml疫瓶中,每瓶50ml,高压灭菌后备用。该培养基适合于各类细菌的增菌培养。
(2)SS琼脂平板:牛肉膏5g、蛋白胨5g、乳糖10g、胆盐8.5g、枸橼酸钠8.5g、硫代硫酸钠8.5g、琼脂20g、枸橼酸铁1g、0.1%煌绿溶液0.33ml、1%中性红溶液2.5ml、蒸馏水1000ml。除了煌绿、中性红以外,将其它各成分混合于蒸馏水中,加热溶化,调PH至7.0,再加入煌绿和中性红,分装于三角烧瓶中,以68.95kPa高压灭菌10分钟,待冷至50℃左右,倾注于无菌平板中,冷后备用。适合于粪便标本中肠道致病菌的分离。
实验报告:
1. 观察示教片并绘图。
2.记录肠道杆菌的分离鉴定程序。
3. 记录肥达氏反应的结果,并判断效价和作出分析。


