DNA分子标记的主要类型
在遗传学研究中广泛应用的DNA分子标记已经发展了很多种,一般依其所用的分子生物学技术大致可以分为两大类:
一类是以Southern杂交技术为核心的分子标记,(如RFLP),这类分子标记被称为第一代分子标记。
一类是以PCR技术为核心的分子标记,(如STS、RAPD、AFLP、SSR)等,这类分子标记被称为第二代分子标记;
单核苷酸多态性(SNP)标记被称为第三代分子标记 。它也是以以PCR技术为基础的分子标记技术。
主要的DNA分子标记
RFLP标记:
RFLP标记是发展最早的DNA标记技术。RFLP是指基因型之间限制性片段长度的差异,这种差异是由限制性酶切位点上碱基的插入、缺失、失重排或点突变所引起的。
RFLP技术主要包括以下基本步骤:
DNA提取→用限制性内切酶酶切DNA→用凝胶电泳分开DNA片段→把DNA片段转移到滤膜上→利用放射性标记的探针杂交显示特定的DNA片段(Southern杂交)和结果分析。
RFLP遍布整个基因组,并且非常稳定,但RFLP实验操作繁琐,检测周期长,成本高昂,不适于大规模的分子育种,在植物分子标记辅助育种中需要将RFLP转换成以PCR为基础的标记。
STS标记:
STS是由特定引物序列所界定的一类标记。
在生物的基因组中常存在大量的单拷贝序列,根据单拷贝DNA两端的序列设计特异引物对基因组DNA进行PCR扩增,所产生的一段序列在基因组中往往只出现一次,从而能够界定基因组的特异位点,将RFLP片段两端测序,设计一对专一引物即可获得STS标记。 STS标记的检测包括PCR扩增和电泳两个步骤,实验操作非常简单;但将RFLP标记转移成STS标记以后,多态性会降低,因此需要再用限制性内切酶酶切扩增产物,产生扩增产物的RFLP,从而提高STS的多态性检测能力。
RAPD标记:
RAPD标记的基本原理是利用合成的随机引物(一般为8~10个碱基)对基困组DNA进行PCR扩增 ,然后电泳检测PCR产物的多态性。
RAPD扩增所需的模板DNA量少,实验操作简单;合成一套引物可用于不同实验室,不同物种的检测。
RAPD标记是一种显性标记,不能区分杂合与纯合基因型 ;RAPD检测受反应条件影响大,并且结果不稳定,重复因型;RAPD检测受反应条件影响大,并且结果不稳定,重复性较差。


