流行性感冒病毒简称流感病毒,引起人类流行性感冒,由于传染性强,发病率高,流行范围大,
故流感在世界上仍属于对人类危害较大的一种传染病。
实验室流感病毒的分离培养和鉴定,不但能及时掌握流感的流行动态,对控制流行也起着很大作用。
流感病毒分离培养程序如下:
一、流感患者标本的采集与处理
1. 发病三日内的急性期患者,用15ml肉汤或Hanks液反复嗽口或咽嗽2~3分钟,然后吐入试管中,亦可经装有二层纱布的无菌小漏斗过滤入试管中。
2. 将咽嗽液置于4℃冰箱中约20分钟,待颗粒物质充分沉淀后,吸上清液约2-5ml置另一无菌试管,加入抗菌素,使每毫升标本中含青霉素1000单位、链霉素1000微克。
3. 混匀后置4℃冰箱内保存备用,24小时内使用。
二、流感病毒的分离培养
流感病毒的初次分离培养应用胚令为12~14日的鸡胚羊膜腔接种,传代培养选用尿囊腔接种,本试验介绍此法。
流感病毒鸡胚尿囊腔接种培养:
【材料】
1. 鸡胚:选孵育9~11日令鸡胚。
2. 病毒:流感病毒悬液(根据需要作适当稀释)。
3. 检卵箱,1ml注射器,眼科镊子和剪刀,卵垫板,石蜡块,钢锥,酒精灯等。
【方法】
1. 于检卵箱上检查鸡胚,若胚影活动,血管清晰则为活胚。且蜡笔画出胚位及气室,并在胚位旁避开血管的地方作一标记为注射部位。将鸡胚置于卵垫板上、用碘酒及酒精棉球消毒注射部位。再用烧灼后的钢锥击一小孔。
2. 用无菌注射器吸取病毒悬液。由小孔刺入并与蛋壳面30º夹角,深约1cm,注入病毒液0.1~0.2ml。
3. 用溶化的石蜡封住接种孔,在蛋壳上写明标本名称、日期、班级、姓名后置35℃培养箱。
4. 每日观察接种后鸡胚存活情况,24小时内死亡者弃去,48~72小时后,活胚置4℃冰箱过夜。
5. 次日,取出4℃过夜鸡胚,将鸡胚置卵垫板上,用碘酒和酒精消毒气室,用无菌眼科剪子剪去气室卵壳,用无菌尖吸管捅破壳膜及尿囊膜层,吸取清亮尿囊液,置于无菌小试管内。


