【材料】
1. 葡萄球菌 大肠杆菌18~24小时普通琼脂斜面培养物。
2. 革兰染色液。
3. 生理盐水，载物玻片，接种环等。
【方法】
（一）细菌涂片的制作
1. 涂片：取清洁无油污载物玻片一张，接种环沾取生理盐水1~2环置于玻片中央，再将接种环火焰灭菌待冷后，沾取葡萄球菌或大肠杆菌菌苔少许，混于生理盐水中，轻轻涂成均匀薄膜。
2. 干燥：室温自然干燥，也可将涂面向上，远离火焰上方微加温干燥（切勿加热过度，以防将标本烧枯）。
3. 固定：标本干燥后，通过酒精灯火焰三次（约2~3秒钟），以杀死细菌并使之固定于玻片上。
4. 染色：可根据不同的染色要求，用相应染色液进行染色。
（二）革兰染色法：涂片的制备方法同前，革兰染色方法可分为四步。
1. 初染：于涂抹面上滴加结晶紫染液数滴，覆盖整个涂面，室温作用一分钟。用自来水轻轻冲洗，甩干水分。
2. 媒染：滴加鲁戈碘液，室温作用一分钟，自来水冲洗，甩干水分。
3. 脱色：将载物玻片浸于95%酒精缸中，上下提取，边提边看，见涂面无色素下流为止（约30秒钟）。自来水冲洗，甩干水分。
4. 复染：加稀释复红染液染30秒钟，自来水冲洗，吸水纸吸干玻片水分。
5. 加油镜检：染色片待干后，于油镜下，调强光视野观察，呈紫色的为革兰阳性菌，呈红色的为革兰阴性菌。
（三）美兰染色法
【方法】
将涂片固定滴加美兰染液于玻片上，染1~2分钟，水洗、待干、镜检。
【结果】
此法为单染色法，菌体和细胞均染成蓝色。常用于脑膜炎球菌及白喉杆菌等细菌染色。
四、细菌基本形态和特殊结构观察
（一）基本形态（示教）
1. 球形：葡萄球菌革兰染色标本片——菌体正园形，染成兰紫色，呈现葡萄串状排列。G+球菌。
2. 杆形：大肠杆菌革兰染色标本片——菌体短杆状，染成红色，呈分散排列。G-杆菌。
3. 螺形：霍乱弧菌革兰染色标本片——菌体弧形，染成红色，呈分散排列。G-弧菌。
（二）特殊结构示教
1. 鞭毛：伤寒杆菌鞭毛染色片——菌体较粗大杆状，染成兰灰色，单个或成堆存在，周围可见到波浪状弯曲、较长、呈兰灰色的鞭毛。
2．荚膜：肺炎双球菌荚膜染色片——视野背景为红色，其中可见到染色呈深红色，矛头状菌体，纵向成双排列，菌体周围有未染上颜色的空白区，即荚膜。
3. 芽胞：破伤风梭菌芽胞染色片——菌体为细长杆状，顶端有染成红色、并大于菌体的球状物即芽胞，呈“鼓槌状”，其他散乱分布的红色球体，为菌体脱落的成熟芽胞。
《附录》
革兰（Gram）染液的配制
1. 结晶紫染液
将1份结晶紫酒精饱和液与4份1%草酸铵水溶液混合即成（14克结晶紫加95%酒精100毫升即为酒精饱和溶液）。
2. 鲁戈（Lugol）碘液
碘1克 碘化钾2克 蒸馏水300毫升
3. 稀释复红液
1份硷性复红饱和液（硷性复红3.2克溶于95%酒精100毫升中。即为硷性复红饱和溶液）加9份5%石炭酸水溶液，先配成石炭酸复红染液（抗酸染色用），取1份石炭酸复红染液加9份蒸馏水即为稀释复红染液。
