显色
◎HRP 催化底物的一步呈色反应，同样需要一定的时间和温度，
◎ 一定要按照说明书规定的时间温度（一般为37°C，10-15 分钟）恒定反应后终止
◎或根据临界值质控血清吸光度值达0.2 左右使的时间而恒定反应时间.
酶标仪判读结果
◎显色反应终止后应立刻比色（30 分钟内）。
常见的显色系统有OPD 和TMB 二种，以后者最为常见，而TMB 酸不易终止因此必须尽快比色以免影响结果。OPD 终止后显棕色，测定波长为490nm； TMB 终止后显黄色，测定波长为450nm， 二种底物的校正波长均用6 30nm。使用双波长的优点可以消除反应板条上的划痕手印的干扰。同时要注意反应板应用纸吸干后才能置酶标仪中比色，否则吸光度易出现负值或损坏滤光片。
报告方式
◎定性试验国内外为便于统一计算，一律按S/C.O 方式报告，S 为标本A 值，C.O 即Cut Off 值（阳性判定值)
◎夹心法和间接法以S/C.O≥1 为阳性；
竟争法与中和法以S/C.O﹤1 为阳性
◎Cut Off 的计算公式以试剂盒说明书的为准常见的有：
◎A） C.O=2.1×N（当N 不足0.05 时按0.05 计），
◎此公式由P/N>2.1 换算而来，常用于夹心法。
◎B） C.O=0.5×N，从抑止率公式换算而来，
◎常用于竟争，中和法
◎C） C.O=N+C（C 为常数），用于间接法。
◎D) C.O=C×P+N（C 为常数），用于间接法。此公式最客观，但对生产厂家要求很高，阴阳性对照测定值要基本恒定。
报告方式
定量分析用已知量的标准品作一系列稀释，ELISA 测定，绘制标准曲线，结果以绝对量或单位表示。
ELISA 的标准曲线每次都要和待测标本做在同一块板上。
◎现有的ELISA 定量试剂盒标准曲线只有在较窄的浓度范围内成直线，要得到精确的结果实属不易。因此严禁用定性试剂盒做定量分析。
灰区概念
把定量分析的正常值范围引入定性分析建立灰区概念，即将CO 值上下的一段区域定为阳性可疑，需重复实验或换试剂重测以确定其阴阳性，如仍落在灰区范围内则报告+（阳性）。
灰区概念对血站系统的献血员筛查尤为重要。
灰区的设置有二种：
1）C.O×（1±CV），
CV 为该试剂的批内CV& nbsp; (一般在15-20%间）；
2）C.O±2s，s 为实验室做室内质控ROC 的s 。
高值钩镰效应（HD-HOOK）
◎在二位点夹心ELISA 中，其剂量反应曲线的高剂量（HIGH DOSE，HD）区段，线性走向不是呈平台状无限后延，而是向下弯曲状，似一只钩子或一把镰刀（HOOK），MILES（197 4）根据此现象写实性地称之为"HD-HOOK" 效应。产生该现象的分子机理有"分子变构说"和"浓度效应"等推论。
◎一步法和二步法均存在，只是前者出现的更早些，大多数是高值低吸光度，很少阴性结果。
质量控制（Quality Control，QC）
◎英国 Whitehead 教授建议生化检验工作的质量控制分为4 个步骤：最佳条件的变异（OCV）；常规条件的变异（RCV）；病人结果的统计（SPR）；室间质量控制（EQA）。前三个步骤即室内质量控制（IQC）。
◎在GLP 概念里QC 即指IQC，其定义为：由实验室工作人员采取一定的方法和步骤，连续评价本室工作的可靠性，旨在监测和控制本室常规工作的精密度，提高批内批间样本检验的一致性，以确定检验报告是否可靠或可否发出的一项工作。
◎免疫测定方法的灵敏度和特异性要比生化方法高得多，因此QC 手段不能照搬生化模式。分为定性和定量二个方面。
