3. 分离纯化质粒DNA
（1）加入150μl冷却的乙酸钾溶液。加盖后，温和颠倒数次混匀，冰浴放置15min。
（2）4℃下离心，12000r/min, 5min，乙酸钾能沉淀SDS与蛋白质的复合物，并使过量的SDS－Na＋转化为溶解度很低的SDS－K＋一起沉淀下来。离心后，上清液若仍混浊，应混匀后再冷至0℃，重复离心。上清液转移至另一干净的Eppendorf管内。
（3）加入等体积的酚／氯仿饱和溶液，反复振荡，离心，12000r/min, 2min,小心吸取上层水相溶液，转移到另一个Eppendorf管中。
（4）上述溶液中加入两倍体积的预冷无水乙醇，混合摇匀，于冰上放置10min。4℃下离心，12000r/min ,5min, 弃去上清液，并将Eppendorf管倒置在干滤纸上，空干管壁粘附的溶液。
（5）加入1mL 70％冷乙醇，洗涤沉淀物，离心，弃去上清液，尽可能除净管壁上的液珠，放置干燥或真空干燥，即得质粒DNA制品。
（6）将DNA沉淀溶于20μlTE缓冲液（临用前加入20μg/mLRNaseA），置－20℃保存，备用
注意事项
（1）细菌培养过程要求无菌操作。细菌培养液、配试剂用的蒸馏水、试管和Eppendorf离心管等有关用具和某些试剂经高压灭菌处理。
（2）制备质粒的过程中，所有操作必须缓和，不要剧烈振荡，以避免机械剪切力对DNA的断裂作用。
（3）加入乙酸钾溶液后，可用小玻璃棒轻轻搅开团状沉淀物，防止质粒DNA可能被包埋在沉淀物内，不易释放出来。
（4）用酚／氯仿混合液除去蛋白效果比单独使用更好，为充分除去残余的蛋白质，可以进行多次抽提，直至两相间无絮状蛋白沉淀。
（5）提取的各部操作尽量在低温条件下进行（冰浴上）
