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离心技术[Centrifugation  Techniques]
作者:未知 来源:生物秀 时间:2006-9-6

    一、基本原理

    物体围绕中心轴旋转时会受到离心力F的作用。当物体的质量为 M、体积为V、密度为D、旋转半径为r、角速度为ω(弧度数/秒)时,可得:

    F=Mω2r或者 F=VDω2r                    (1)

    上述表明:被离心物质所受到的离心力与该物质的质量、体积、密度、离心角速度以及旋转半径呈正比关系。离心力越大,被离心物质沉降得越快。

    在离心过程中,被离心物质还要克服浮力和摩擦力的阻碍作用。浮力F}和摩擦力F}}分别由下式表示:
    F'=VD'ω2r                             (2)


    沉降系数对于生物大分子来说,多数在(1~500)×10-13秒之间。为应用方便起见,人们规定1×10-13秒为一个单位(或称1S)。一般单纯的蛋白质在1~20S之间,较大核酸分子在4~100S之间,更大的亚细胞结构在30~500S之间。
    实际应用中,离心机工作时对单位质量物质产生的离心力是以地心引力(Gravity)的倍数来表示的,这种方法表示的离心力称为相对离心力(RCF),常用“数字×g”来表示。

    其中角速度ω与每分钟转数rpm的关系是
               ω=2πrpm / 60
    所以       RCF=1.119×10-5·rpm2·r                        (6)
    根据这个公式,相对离心力和每分钟转数之间便可以互换,这种互换关系是很有实用价值的。
    二、离心技术的应用
    根据应用目的不同,离心机有分析用和制备用两种。分析用超速离心机仅能对小样品(小于1ml)进行分析(如分子量的测量);制备用离心机是为提取、纯化大分子组分设计的,可对10~2000ml的样品进行分离。
    制备用离心机是应用最广泛的离心机,根据其性能可分为低速离心机(最大速度不超过10,000rpm)、高速离心机(High-speed centrifuge,最大转速20,000-25,000rpm)和超速离心机(Ultracentrifuge,最大离心力可超过5000,000×g,即75,000rpm,r=8cm)。有的低速离心机的离心室有冷却装置;高速离心机都有冷却装置,以防止转轴的温度过高和保护生物样品;所有超速离心机都有真空装置,以减少离心室内空气和转头的摩擦作用。高速和超速离心机的转头都标有最大转速,离心时绝对不得超过这一限度,否则会引起转头破裂,仪器损坏和人身伤亡。
    制备用离心机在应用方法上有沉降离心和梯度离心两种。

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