（2）核黄素-TEMED系统，其中核黄素是引发剂，TEMED是加速剂。这一催化剂系统需较强的光线和少量氧。
聚丙烯酰胺凝胶具有三维网状结构，能起分子筛作用。用它作电泳支持物，对样品的分离不仅取决于各组分所带电荷的多少，也与分子大小有关。凝胶网孔的大小主要受成胶物的总浓度及Acr和Bis的比例的影响。一般电泳采用成胶物质总浓度为7.5%，此浓度称为标准凝胶浓度。如果改变总胶浓度，也应相应改变Acr和Bis的比例。
总胶浓度为5%以下时，Acr：Bis在20左右。
总胶浓度为5~10%时， Acr：Bis在40左右。
总胶浓度为5~20%时， Acr：Bis在125~200左右。
实验中应根据分子量大小，选择合适的凝胶总浓度和Acr和Bis的比例。
分子量与凝胶浓度的关系
2、不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本原理
不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳是在聚丙烯酰胺凝胶支持物的介质缓冲液组成、缓冲液pH、凝胶孔径和电势梯度不连续的条件下进行的电泳。不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳有较高的分辨率。这是因为分离过程中不仅有电荷效应和分子筛效应（存在于分离胶中），而且还有一种独特的浓缩效应。下面简单介绍不连续园盘电泳的基本原理：
(1)浓缩效应 不连续园盘电泳一般是在小玻璃管内进行的。把三种性质不完全一样的聚丙烯酰胺凝胶重叠起来。如图4-3所示，上层为样品胶，中间为浓缩胶，这两层胶的凝胶浓度为3%是大孔胶，应用Tris-HCl 缓冲液，其pH6.7。下层是分离胶，此层凝胶总浓度为7.5%，是小孔胶，也用Tris-HCl 缓冲液，pH8.9。上下电极槽缓冲液是Tris-甘氨酸缓冲液，pH=8.3。通电后，向阳极泳动的阴离子有三种，即Cl -，蛋白质阴离子（Pr -）和甘氨酸阴离子（Gly -）。在样品胶及浓缩胶pH=6.7的环境下HCl 全部电离为Cl-，甘氨酸仅极少部分电离为Gly-（甘氨酸pI=6.0），一般酸性蛋白质也解离为阴离子。这样，Cl –泳动最快（称快离子），Gly-泳动最慢（称慢离子），蛋白质介于其间。通电后，快离子很快超过蛋白质离子和Gly-，泳动到最前面。于是，快慢离子之间形成一个离子浓度低的区域，即低电导区域，低电导区域有较高的电压梯度。电压梯度驱动慢离子加速泳动。这样，当快慢离子移动速度相等时，就建立 一个不断向阳极移动的界面。Pr –的泳动速度恰好介于快慢离子之间。因而被挤压在快慢离子之
间形成一条窄带。这种浓缩作用可使蛋白质浓缩
数百倍。血清蛋白在纸上电泳和醋酸纤维素薄膜电泳上仅可分成5-7个组分。而在聚丙烯酰胺凝胶电泳上则可以分为20-30个组分。
(2)电荷效应 蛋白质样品在界面处被浓缩成一狭窄的高浓度蛋白质区，但由于每种蛋白质分子所带有效电荷不同，因而泳动率也不同，因此各种蛋白质就按泳动率快慢顺序排列成一个一个圆盘区带。在进入分离胶时，电荷效应仍起作用。
(3)分子筛效应 当被浓缩的蛋白质样品从浓缩胶进入分离胶时，pH值和凝胶孔径突然改变，选择分离胶的pH值8.9接近甘氨酸的Pka值（9.7-9.8），这样慢离子的解离度增大，因而它的有效泳动率也增加。此时慢离子的有效泳动率超过了所有蛋白质的有效泳动率。这样，高电势梯度不存在了，各种蛋白质仅会由于其分子量或构型的不同，在一个均一的电势梯度和pH条件下，根据其通过一定孔径的分离胶时所受阻滞程度的不同，表现出不同的泳动率而被分开。（四）高效毛细管电泳
1．基本原理
高效毛细管电泳（High Performance Capillary Electrophoresis，HPCE）和一般电泳法的区别在于使用毛细管柱。在熔融石英毛细管内壁覆盖一层硅氧基（Si-O）阴离子，由于吸引了溶液中的阳离子，由此在毛细管内壁形成表面带阴离子的双电层。层外缘扩散层中富集的阳离子被电场阴极吸引导致溶液向阴极的流动，这种效应称为电渗。电渗流的速度u eo和电场强度E成正比，定义电渗速度μeo和场强E的比值为电渗淌度μeo ，即 μeo=u eo/E
电渗淌度与硅氧层表面的电荷密度成正比，与离子强度的平方根成反比。在低pH条件下，不着硅氧层形成分子（Si -OH），因而减少了表面电荷密度，故电渗速度减小。如在pH 9的绷砂缓冲液中电渗速度约2mm /s ，而在pH 3介质中电渗速度减小约一个数量级。
