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电泳技术[Techniques  in  Electrophoresis]
作者:未知 来源:生物秀 时间:2006-9-6

    三、电泳技术的种类
    电泳技术的种类很多。根据有无固体支持物,可分为两大类,即界面电泳和区带电泳。界面电泳是指在溶液中进行的电泳,没有固体支持物。当溶液中有几种带电粒子时,通电后,由于不同粒子泳动速度不同,在溶液中形成相应的区带界面。但区带界面可因为扩散而易于互相重叠,不易得到纯品,且分离后不易收集,故目前已很少应用界面电泳。区带电泳是指在支持物上进行的电泳。支持物将溶液包绕在其网孔中,防止溶液自由移动。通电后各种带电粒子可以形成许多清晰的区带。故区带电泳的分离效果远比界面电泳的好。根据支持物的不同,常用的区带电泳又可分为纸上电泳、醋酸纤维素薄膜电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳及琼脂糖凝胶电泳等。
    (一)醋酸纤维素薄膜电泳
    醋酸纤维素薄膜电泳是利用醋酸纤维素薄膜做固体支持物的电泳技术,和纸上电泳相似是在其基础上发展起来的。该电泳技术具有比纸电泳电渗小,分离速度快、样品用量小、而分辨率高、分离清晰等优点。
    (二)琼脂糖凝胶电泳
    琼脂糖(Agarose)是经过挑选,以质地较纯的琼脂(Agar)作为原料而制成的。琼脂在化学上是由琼脂糖和琼脂胶组成的复合物。琼脂胶是一种含有硫酸根和羟基的多糖,它具有离子交换性质,这种性质会给电泳及凝胶过滤以不良的影响。琼脂糖是直链多糖,它由D-半乳糖和3.6-脱水-L-半乳糖的残基交替排列织成(图4-2)。

    琼脂糖主要通过氢键而形成凝胶。电泳时因凝胶含水量大(98-99%),近似自由电
    泳,固体支持物的影响较少,故电泳速度快,区带整齐。而且由于琼脂糖不含带电荷的基团,电渗影响很少,是一种较好的电泳材料,可达到较好的分离效果。
         (二)聚丙烯酰胺凝胶电泳
        1、聚丙烯酰胺的合成和结构
    聚丙烯酰胺凝胶是由丙烯酰胺(Acrylamide简写为Acr)和交联剂甲叉双丙烯酰胺(N,N¹-methylene-bisacrylamide,简写Bis)在催化剂的作用下,聚合交联成含有酰胺基侧链的脂肪族大分子化合物。单体及聚合物的化学结构式见29页。
    催化剂有两个系统可供选用。
    (1)过硫酸胺-四甲基乙二胺(N、N、N、N-Tetramethyl-ethylene Diamine,简写TEMED)系统,其中过硫酸铵是引发剂。它在光照射下裂解成带有自由基的硫酸铵,通过自由基的传递,使丙烯酰胺成为自由基,发动聚合反应。TEMED是加速剂,加快引发剂释放自由基的速度。

    (NH4)2S2O8   →   (NH42SO4

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