在实际工作中，对于同一个凝胶柱来说，各种分子量的物质有其固定的洗脱体积。因此，准确掌握凝胶柱的一些基本因素是十分有益的。
凝胶柱的总体积（Vt）：凝胶颗粒之间空隙的体积（外水体积Vo）、凝胶颗粒网眼内的体积（内水体积Vi）和凝胶颗粒基质本身的体积（Vr）的总和（图3-8）。
Vt=Vo+Vi+Vr
如果被分离的物质分子量很大，完全不能进入网孔内，那末它从柱上洗脱下来（小样品时以洗脱峰为准）所需的洗脱液体积（Ve）就等于颗粒间隙的体积（Vo），即Ve=Vo。如果被分离物质的分子量极小，可以非常自由的通过网孔即进出凝胶颗粒，那么它的洗脱液体积就应当等于颗粒内和颗粒间隙体积的总和（Ve=Vo+Vi）。
至于分子量位于上两者之间的，其洗脱体积便位于Vo和Vo+Vi之间。可见，分子量大小不同的物质，其洗脱体积不同，从而可以用于物质的分离。
另外，如果在有已知分子量的标准物质做对照的条件下，就可以根据洗脱体积来估计待测物质的分子量（图3-9）。
Sephadex G-200（超细颗粒）柱2.6×70cm，洗脱液：0.05mol/L磷酸钾缓冲液，内含0.1 mol/LNaCl及0.02%
