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总糖和还原糖的测定:3,5-二硝基水杨酸法
作者:未知 来源:生物秀 时间:2006-9-5

     二、样品中还原糖的提取

    准确称取0.5g藕粉,放在100mL烧杯中,先以少量蒸馏水调成糊状,然后加入约40mL蒸馏水,混匀,于50℃恒温水浴中保温20min,不时搅拌,使还原糖浸出混。过滤,将滤液全部收集在50mL的容量瓶中,用蒸馏水定容至刻度,即为还原糖提取液。

    三、样品总糖的水解及提取

    准确称取0.5g淀粉,放在大试管中,加入6M HCl 10mL,蒸馏水15mL,在沸水浴中加热0.5h,取出1~2滴置于白瓷板上,加1滴I-KI溶液检查水解是否完全。如已水解完全,则不呈现蓝色。水解毕,冷却至室温后加入1滴酚酞指示剂,以6M NaOH溶液中和至溶液呈微红色,并定容到100mL,过滤取滤液10mL于100mL容量瓶中,定容至刻度,混匀,即为稀释1000倍的总糖水解液,用于总糖测定。

    四、样品中含糖量的测定

    取7支15mm×150mm试管,分别按下表加入试剂: 

    项目

    空白

    还原糖

    总糖

    0

    1

    2

    3

    4

    5

    6

    样品溶液(mL)

    1

    1

    1

    1

    1

    1

    1

    3,5-二硝基水杨酸试剂(mL)

    2

    2

    2

    2

    2

    2

    2

    A540

     

     

     

     

     

     

     

    加完试剂后,于沸水浴中加热2min进行显色,取出后用流动水迅速冷却,各加入蒸馏水9.0mL,摇匀,在540nm波长处测定光吸收值。测定后,取样品的光吸收平均值在标准曲线上查出相应的糖含量。

    五、计算

    按下式计算出样品中还原糖和总糖的百分含量:

    式中:C──还原糖或总糖提取液的浓度,mg/mL;

    V──还原糖或总糖提取液的总体积,mL;

    m──样品重量,g;

    1000──mg换算成g的系数。

    注意事项

    标准曲线制作与样品含糖量测定应同时进行,一起显色和比色

    上一页  [1] [2] 

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