用Oligo 设计引物时的3个标准
Tm 值曲线以选取5’到3’的下降形状有利于引物引发聚合反应。
Frq 曲线宜选用3’端Frq 值相对较低的片段。
ΔG 值在5’端和中间值比较高，而在3’端相对低
选中引物
引物分析
首先检查引物二聚体尤其是3’端二聚体形成的可能性。
二项检查是发夹结构（hairpin）；与二聚体相同，发夹结构的能值越低越好。
第三项检查为GC 含量，以45-55％为宜。
第四False priming 检查
Final PCR information
Search for primer using Oligo 6.44
Online primer3 service
http://frodo.wi.mit.edu/
