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分子杂交与印渍技术
作者:未知 来源:生物秀 时间:2006-9-5

    一、分子杂交与印渍技术的原理
    (一)分子杂交:

    不同来源的单链核酸(DNA或RNA),只要它们具有大致相同的碱基序列,经过退火处理,就能重新形成杂种双螺旋,这一现象称为分子杂交(molecular hybridization)。
    利用这一原理,就可以使用已知序列的单链核酸片段作为探针,去查找各种不同来源的基因组DNA分子中的同源基因或同源序列。

    (二)印渍技术:

    印渍技术的原理首先由Edwen Southern在1975年提出。其基本操作过程是:将DNA片段在琼脂糖凝胶中电泳分离后,置NaOH液中浸泡,从而将凝胶中的DNA变性为单链;然后将一张硝酸纤维素膜铺在凝胶上,上面放上大量吸水纸巾,利用吸水纸巾的毛细作用,将单链DNA从凝胶中转移到硝酸纤维素膜上,再将膜置80℃烘干并使单链DNA分子固定在膜上,再用于分子杂交分析。因此,用于DNA印渍的技术又称为Southern Blotting或Southern 杂交。
    Southern Blotting


    (三)探针技术:

    将已知序列的核酸片段用放射性同位素、生物素或荧光染料进行标记,然后用于分子杂交,杂交后通过放射自显影、荧光检测或显色技术,使杂交区带显现出来。

    二、印渍技术的类别及应用
    (一)DNA印渍技术:
    又称为Southern杂交,即DNA-DNA杂交分析。
    (二)RNA印渍技术:
    又称为Northern杂交,即RNA-DNA杂交分析。
    (三)蛋白质印渍技术:
    又称为Western杂交,或免疫印渍技术,即利用抗原-抗体反应,检测转移到硝酸纤维素膜上的特异性蛋白质。

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