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如何提高PCR扩增的保真性?
作者:佚名 来源:生物秀 时间:2006-9-5

    下游应用为基因筛选、测序、突变检测和分子诊断等等的用户,对PCR保真性要求很高。

    降低PCR扩增的错误率可以通过使用各种具有高保真性的DNA聚合酶来实现。

    DNA聚合酶的保真度用错误率来表示,包括碱基错配率、PCR产物突变百分数等。

    在目前已发现的所有耐高温DNA 聚合酶中,Pfu酶的出错率最低,保真度最高(见附表)。

    除对酶进行选择,研究者也可通过优化反应条件来进一步减少PCR突变率,包括优化缓冲液组成、耐热聚合酶的浓度及对PCR循环条件进行优化等。

    附表: DNA聚合酶的扩增错误率

    耐热DNA聚合酶

    碱基错配率

    PCR产物突变百分数(%)

    Pfu DNA Polymerase

    1.3×10-6

    2.6

    Taq DNA Polymerase

    8.0×10-6

    16.0

    VentR ® DNA Polymerase

    2.8×10-6

    5.6

    Deep VentR ® DNA Polymerase

    2.7×10-6

    5.4

    Tfl DNA Polymerase

    8.3×10-6

    16.6

    Tbr DNA Polymerase

    9.5×10-6

    19.0

    ΜlTmaTM DNA Polymerase

    55.3×10-6

    110.6

       ★   应用lacI分析,对lacI目标基因进行扩增和克隆,检测PCR产物突变百分数,从而测定DNA聚合酶错误率
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