一． 实验目的
1、 学习掌握ELISA的原理和操作方法。
2、 绘制IgG 水平曲线，找出反应最佳浓度。
3、 了解探索ELISA反应的最佳条件的方法。
二、实验原理
酶联免疫吸附测定(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay, ELISA)技术自20 世纪70年代初问世以来，发展非常迅速，目前被广泛应用于免疫学、医学、生物学等许多领域。ELISA是以免疫学反应为基础，将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合起来的一种敏感性很高的试验技术。其基本原理是根据抗原或抗体能在一定条件下结合到固相载体的表面仍保持其免疫活性，抗原或抗体与酶结合形成的结合物仍能保持免疫学和酶的活性。结合物与相应的抗原、抗体结合后，可根据加入相应的酶底物的颜色反应来判断有无相应的免疫反应，而且颜色的深浅与相应的抗原或抗体的量在一定的范围内成正比。由于抗原、抗体的反应在1 种固相载体——聚苯乙烯微量滴定板的孔中进行，每加入一种试剂孵育后，可通过洗涤除去多余的游离反应物，从而保证实验结果的特异性与稳定性。在实际应用中，通过不同的设计，具体的实验步骤可有多种，如用于检测抗体的间接法、用于检测抗原的双抗夹心法、用于检测小分子抗原或半抗原的抗原竞争法等等。常用的是间接ELISA法（见图19－1）和双抗夹心ELISA法。

三．实验仪器和试剂
1、 仪器
酶标仪（ELISA Reader），微量可调加样器1套（10、20、100、200、1000 μL），恒温培养箱，pH 计，冲洗器（或洗扳机），洗涤瓶，康氏管，50 mL烧杯，吸管。96孔酶标板或64 孔酶标板。

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