(三) 转基因植株的Northern检测
1 异硫氰酸胍法提取转基因植物总RNA
1) 称取2g新鲜植株，液氮研磨成粉末移入50ml 离心管中。
2) 加入异硫氰酸胍裂解液6mL涡旋90sec，加入2M/LNaAc(pH4.8)2mL，涡旋90 sec，再加入6mL苯酚，2 mL氯仿，混匀。4℃，8000 rpm，离心15min。
3) 弃沉淀，取上清至另一干净DEPC水处理过的离心管中加入2倍体积无水乙醇，-20℃放置1h。
4) 4℃，8000 rpm，离心10 min。弃上清，在沉淀中加入1mL 2 M/L LiCl。
5) 移入1.5 mL 离心管中，冰浴2 h。
6) 3 000 rpm，离心15 min。弃上清，在沉淀中加入400 uL水(经DEPC处理)，再加入400 μL氯仿，混匀(去蛋白)。
7) 13 000 rpm，离心6 min。上清加入1/10体积3M NaAc(pH5.2)和；两倍体积的无水乙醇。-20℃放置过夜。
8) 13 000 rpm，离心13 min。将沉淀RNA用70%乙醇洗涤2 次（70%乙醇用DEPC水配制）。
9) RNA沉淀室温下稍干燥。加100 μL DEPC水溶解，-20℃保存。
2 甲醛变性琼脂糖凝胶电泳分析总RNA。
1) 配制1%变性琼脂糖胶 称取0.2 g 琼脂糖，加入DEPC水12.6 mL，5 X电泳缓冲液4 mL，加热使溶解。稍冷却加入37%甲醛3.4 mL，混匀，室温凝固0.5～1h(通风橱操作)。
2) 50 V恒压电泳，至溴酚蓝移至前沿1 cm处停止电泳。
3) 在EB中染色15～20 min，紫外灯下观察结果。
4) 在含有甲醛的凝胶上进行RNA电泳
RNA杂交膜的制备、探针的制备和杂交过程等具体操作方法见《分子克隆实验》。
四. 实验结果分析
1． 观察转基因植物愈伤组织生长特征。
2． 进行PCR扩增产物电泳。
3． 观察转基因植株的Southern检测结果。
4． 观察转基因植株的Northern检测结果。
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