二．材料与方法
1 材料
肝脏RNA
2 仪器、用具
PCR仪、0.2ml PCR管、移液器
3 试剂
(1) RNase Free H2O；10×RT PCR Bμffer (含dNTP Mixture)；RNase Inhibitor(40U/μl)；AMV Reverse Transcriptase XL (5U/μl)；RNase H (60U/μl)；5×Hybrid RNA Degradation Buffer；5×RNA (ssDNA) Ligation Buffer；T4 RNALigase； 40% PEG#6000
(2) ddH2O；10×PCR Buffe；MgCl2 (25mM)；3 sites Adaptor Primer (20μM)；TaKaRa Taq 酶
(3) TE
(4) 无水乙醇（预冷）
4 方法
(1) 1st strand cDNA 的合成
② 反转录条件为：30℃ 10min；50℃
2) Hybrid RNA的分解
① 按下列组成配制RNA分解反应液：
② 上述反应液中加入1μl 的RNase H，30℃反应1h。
③ 上述反应液加入100μl ddH2O，500μl 冰冷的无水乙醇。
④ 混匀，-20℃放置30min，进行乙醇沉淀。
⑤ 14000rpm 离心10min，弃上清。
⑥ 加入500μl的70%乙醇。
⑦ 14000rpm 离心5min，弃上清，干燥沉淀。
(3) 单链cDNA 环化（连接反应）
① 按下列组分配制连接反应液：
