真核细胞总RNA 制备方法有多种，包括异硫氰酸胍—氯化铯超速离心法、盐酸胍—有机溶剂法、氯化锂—尿素法以及热酚法、异硫氰酸胍法—酚—氯仿一步法以及TRIzol试剂提取法等。目前实验室提取总RNA的常用方法为异硫氰酸胍法—酚—氯仿一步法和TRIzol试剂提取法。异硫氰酸胍法制备真核细胞总RNA，是将已知最强的RNase酶抑制剂异硫氰酸胍、β-巯基乙醇和去污剂N-十二烷基肌氨酸钠联合使用，抑制了RNA的降解，增强了核蛋白复合物的解离，使RNA和蛋白质分离并进入溶液，RNA选择性地进入无DNA和蛋白质的水相，容易被异丙醇沉淀浓缩。
二． 材料与方法
1 材料
实验鱼，购于市场。
2 仪器、用具
台式离心机、恒温水浴锅（70℃）、分析天平、移液器、一次性注射器、方盘、镊子、手术剪、培养皿、1.5ml离心管
4 方法
1） 材料的准备
(1) 将培养皿、剪刀、眼科镊灭菌，-20℃预冷。
(2) 用泡沫盒盛装碎冰，将培养皿置于冰上，将剪刀、镊子置于培养皿中。
(3) 用桶盛装碎冰，加入少量的自来水，用纱布包裹鱼放入桶中。
(4) 将已麻痹的鱼置于方盘中，用剪于肛门向前及斜向上将腹腔剪开，取出内脏，分离肝脏置于培养皿中。
(5) 取1.5ml的离心管于分析天平上，调零。
(6) 用镊子取20-30mg的肝脏组织于1.5ml的离心管中，称重。
2） 实验操作
(1) 取约30mg组织于1.5ml 离心管中，加入175μl SV RNA Lysis Buffer，用一次性注射器将组织压碎、反复抽打混匀。
(2) 加350μl SV RNA Dilution Buffer（蓝色），翻转管子3-4 次混匀，置70℃水浴3min。
(3) 冰上冷却1-2秒，14000rpm离心10min，上清液移入一新离心管。
(4) 加入200μl 95%的乙醇，枪头混匀。
(5) 将上述混合液移入Spin Basket Assembly，14000rpm离心1min，弃滤液。
(6) 加入600μl SV RNA Wash Solution（with ethand added），14000rpm离心1min，弃滤液。
(7) 在一新离心管中配制DNase incubation mix：
(8) 将上述50μl混合液直接加在Spin Basket的膜上，室温（20-25℃）保育15min。
(9) 加200μl SV DNase Stop Solution（with ethand added）至Spin Basket 14000rpm，离心1min。
(10) 加600μl SV RNA Wash Solution，14000rpm离心1min，弃滤液。
Yellow core Buffer 40μl MnCl2，0.09M 5μl DNase I 5μl
(11) 加250μl SV RNA Wash Solution，14000rpm离心2min，将Spin Basket转移到一新离心管中。
(12) 加50μl Nuclease-Free Water 至膜上，14000rpm离心1min，溶解RNA，-20℃保存。
(13) 取5μl RNA样品，1 %琼脂糖凝胶电泳检测RNA质量。
