RevertAidTM First Strand cDNA Synthesis Kit
1. 冰上操作：在100μl EP 管
（经DEPC 水处理过并消毒备用的）中加入
| RNA ( ? ) 0.1-5μg Oligo(dT) primer (0.5μg/μl) 1 μl OR randon hexamer primer (0.2μg/μl) 1 μl Deionized water TO 12 μl |
离心混匀
↓
2．孵育： 70℃ 5min
↓
0℃ 冰水浴立刻终止 离心
3．加冰上操作
| 5×reaction buffer 4μl RiboLockTM Ribonuclease inhibitor(20U/μl) 1μl dNTP mix (10M) |
↓
离心混匀
4．孵育： 37℃ 5min
OR 25℃ 5min(IF random hexamer primer)
↓
5. 逆转录：加RevertAidTM M-MuLV Reverse Transcriptase (200u/μl)1μl
↓
6. 孵育： 42℃ 60min
OR 25℃ 10min →42℃ 60min(IF random hexamer primer)
↓
7 .完成： 70℃ 10min
↓
0℃ 立刻终止后将 cDNA 冻置-20℃ 或即刻PCR
逆转录实验步骤
5. 完成： 95℃ 10min（破坏MLV）
↓
-20℃保存
