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DNS法及聚酰胺薄膜层析技术测定蛋白质N—末端和蛋白质的氨基酸组成分析
作者:佚名 来源:生物秀 时间:2006-9-1

    DNS-氨基酸的分离和鉴定:
    1.溶剂系统
    第Ⅰ相展层溶剂系统(1):甲酸(88%)∶水=1.5∶100(V/V
    第Ⅱ相展层溶剂系统(2):苯∶冰乙酸=9∶1(V/V
    第Ⅲ相展层溶剂系统(3):乙酸乙酯∶甲醇∶冰乙酸=20∶1∶1(V/V
    第Ⅳ相展层溶剂系统(4):0.05mol·L-1磷酸三钠∶乙醇=3∶1(V/V
    2.混合标准DNS-氨基酸图谱
    (1)DNS-氨基酸混合样品,经双向展层后大部分可得到分离(如图19-4),第Ⅰ相用溶剂(1),第Ⅱ相用溶剂(2)。
    (2)DNS-天冬氨酸(Asp)和DNS-谷氨酸(Glu);DNS-丝氨酸(ser)和DNS-苏氨酸(Thr);DNS-精氨酸(Arg)和DNS-组氨酸(His);DNS-α-赖氨酸(Lys)和DNS-ε-赖氨酸(Lys)可能分不开;DNS-丙氨酸(Ala)和DNS-NH2也可能重叠在一起。为了分离这些DNS化的氨基酸,可用溶剂(3)在第Ⅱ相再展层一次(图19-5)。

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