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离子交换柱层析分离核苷酸
作者:未知 来源:生物秀 时间:2006-9-1

    三、试剂及器材:
    1.试剂:
    ①RNA(酵母RNA,商品)
    ②强碱型阴离子交换树脂201×8(聚苯乙烯—二乙烯苯、三甲胺季铵碱型,全交换量大于3毫摩尔/克干树脂,100—200目):用水浸泡并利用浮选法除去细小颗粒,使用时先用0.5mol·L-1氢氧化钠溶液浸泡1小时,以除去碱溶性杂质,然后用无离子水洗至中性。再用1N盐酸浸泡半小时,除去酸溶性杂质,再用无离子水洗至中性,然后用1mol·L-1甲酸钠溶液浸泡,使树脂转变成甲酸型。将树脂装入柱内,继续用1mol·L-1甲酸钠溶液洗,直到流出液中不含氯离子(用1%硝酸银溶液检查)。最后用1mol·L-1甲酸洗,直到260nm处光密度值低于0.020,并用蒸馏水洗至接近中性,即可使用(装置见图14—2)。
    ③1mol·L-1甲酸:取21.4毫升88%甲酸定容至500毫升。
    ④1mol·L-1甲酸钠溶液:称34.15克甲酸钠用水溶解定容至500毫升。
    ⑤0.02mol·L-1甲酸:取10毫升1mol·L-1甲酸定容至500毫升。
    ⑥0.15mol·L-1甲酸:取75毫升1mol·L-1甲酸定容至500毫升。
    ⑦0.01mol·L-1甲酸—0.05mol·L-1甲酸钠溶液(pH4.44):取5毫升1mol·L-1甲酸、25毫升1mol·L-1甲酸钠溶液定容至500毫升。



    ⑧0.1mol·L-1甲酸—0.1mol·L-1甲酸钠溶液(pH3.74):取50毫升1mol·L-1甲酸、50毫升1mol·L-1甲酸钠溶液定容至500毫升。
    ⑨0.3mol·L-1氢氧化钾溶液:取1.68克氢氧化钾用水溶解定容至100毫升。
    ⑩2mol·L-1过氯酸:取17毫升70—72%过氯酸定容至100毫升。
    111mol·L-1盐酸。
    120.5mol·L-1氢氧化钠溶液。
    2.器材:
    ①玻璃柱(内径1.1厘米、高20厘米)。
    ②下口瓶。
    ③部份收集器。
    ④紫外分光光度计。
    ⑤紫外检测仪。
    ⑥恒温水浴锅。

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