（8）操作压过大可使流速变慢，此外还可以导致凝胶胶面下降，柱床容积的改变，相应测出Vt，Vo，Ve等也改变，造成实验结果的误差。
（9）由于葡聚糖凝胶为糖类化合物，并且一定要在液相中操作，所以有必要注意防止发霉与生长细菌。一般可用0.02%的叠氮钠（NaN3）溶液，它极易溶于水，不与蛋白质和糖反应，也不改变它们的层析效果，也可用0.002%的洗必泰（hibitane）溶液。在弱酸性溶液中，可用0.05%（或0.01%—0.02%）三氯丁醇溶液，但它在强碱性溶液或加热到60℃以上时就要分解。在弱碱性溶液中也可用0.01%乙酸汞溶液防腐消毒。一般不用氯仿、丁醇、甲苯等为防腐剂。因为它们能引起凝胶颗粒的收缩，同时还能进入层析仪器的塑料部件，使塑料变软，造成不良后果。
（10）使用部分收集器时，将其转盘调节到最外圈，从第一管开始，否则会造成转换臂的转动与转盘不同心，以致洗脱液流到管外。
凝胶层析中常遇到的故障之原因与排除方法总结见表17-1。
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故 障 |
产 生 的 原 因 |
排 出 的 方 法 |
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恒压瓶不能恒压 |
1．恒压瓶上口或下口橡胶塞未塞紧或橡胶塞插玻璃管处漏气 |
1．找出漏气原因，塞紧橡胶塞 |
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层析柱连接后，进水口无液体滴出 |
2．层析柱进水口或出水口的止水夹未打开 3．进水口塑料管中有气泡 |
2．打开止水夹 3．排除塑料管中的气泡 |
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层析柱出水口无液体流出 |
4．出水口的止水夹未打开 5．层析柱下口螺丝未旋紧，因漏气而造成出水塑料管中有气泡 6．出水口塑料管被凝胶阻塞 |
4．打开出水口止水夹并调节流速 5．找出产生气泡的原因，排除气泡 6．将层析柱中的凝胶倒出，冲洗尼龙网排除塑料管中的凝胶，重新装柱 |
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层析过程中流速逐渐减慢 |
7．样品中或洗脱缓冲液中含有不溶颗粒将胶床表面阻塞 8．操作压过高，将凝胶胶床压紧 9．测定内水时硫酸铵浓度太大；凝胶脱水使胶床压紧 10．加样时未注意恒压，加样后胶床床面下降 11．长期使用，微生物生长 12．装柱时凝胶未完全溶胀，平衡时流速即逐渐减慢 13．凝胶颗粒过细，或由于用暴力搅动凝胶使凝胶颗粒打碎 |
7．采用离心或过滤法除去不溶颗粒，用滴管移去柱床表面1— 8．重新装柱，采用适当的操作压 9．将凝胶取出用缓冲液反复洗涤，溶胀重新装柱。适当降低硫酸铵浓度 10．加样时应根据操作压，将塑料管下水口抬高至相应的操作压 11．层析柱不用时，在平衡缓冲液中加入0.02%叠氮钠或0.002%洗必泰，并使其充满柱床体积，以抑制细菌生长，暂时不用的柱应定期用缓冲液过柱冲洗，也可以防止微生物生长 12．将凝胶取出，待其完全溶胀后重新装柱 13．取出层析柱中的凝胶，用漂浮法除去过细的颗粒，重新装柱，搅拌凝胶应防止暴力 |
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层析柱胶床中有气泡 |
14．装柱前，凝胶未抽气或煮沸，在凝胶中混入空气 15．加样不当使空气进入凝胶胶床 16．从冰箱中取出凝胶或凝胶缓冲液立即装柱，或装柱后被太阳暴晒 |
14．在凝胶柱上层的气泡可用细头长滴管或细塑料管将气泡取出或赶走，并重新平衡，稳定胶床后再使用，若气泡太多则应抽气或煮沸后自然冷却后装柱 15．小心加样防止带进气泡 16．凝胶或缓冲液应放置到室温后才能装柱，避免太阳直射 |
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层析柱胶床破裂 |
17．大量空气进入层析柱 18．进水口流速慢，出水口流速快 |
17．找出空气进入层析柱的原因，重新装柱 18．找出进出水口流速不一致的原因，重新装柱 |
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故 障 |
产 生 的 原 因 |
排 队 的 方 法 |
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样品进入凝胶后条带扭曲 |
19．样品或缓冲液中有颗粒或不溶物 20．凝胶表面不平，或胶床不均匀 |
19．按方法7处理样品或缓冲液 20．将凝胶柱置于垂直位，轻轻搅动胶床表面1— |
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凝胶层析分辨率不高 |
21．凝胶层析柱装得不均匀 22．凝胶G型选择不当 23．加样量太大 24．柱床太短 25．样品浓度高，粘度大而形成拖尾 26．洗脱时流速太快 27．分部收集时每管体积过大 |
21．将凝胶取出重新装柱 22．根据欲分离物质分离的情况，选择合适的凝胶G型与粒度 23．为提高分辨率，分析时加样量一般为柱长的1—2%，最多不能超过5% 24．将柱床高度适当加长 25．根据紫外测定的光吸收值将样品适当稀释 26．调节洗脱的流速，（本实验为3ml/10min） 27．控制每管收集量，为便于紫外测定，每管收集量以2.8—3ml为宜 |
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分部收集时，收集盘转动一次间隔数只试管或滴管口偏离相应的试管 |
28．使用前未经定位或开始收集后随便移动转换臂，从而造成收集盘与转换臂转动不同步 |
28．将自动收集器换向开关拨向“顺”，连续按手动开关，使收集盘与转换臂同时以“顺”时针方向转至外圈零位。将换向开关拨至“逆”，使转换臂的滴管口对准第一个试管中心，打开自动开关即可进行同步收集 |
