3、当0＜K_d＜1时，V_e=V_o+K_dV_i。表示内体积只有一部分可被组分利用，扩散渗入，V_e即在V_o+V_i之间变化（图中组分Ⅱ）。

4、有时K_d＞1，表示凝胶对组分有吸附作用，此时V_e＞V_o+V_i。例如一些芳香族化合物的洗脱体积远超出理论计算的最大值，这些化合物的Kd＞1。如苯丙氨酸，酪氨酸和色氨酸在Sephadex G-25中的Kd值分别为1.2，1.4和2.2。

在实际工作中，对小分子物质也得不到Kd=1的数值，特别是交联度大的凝胶差别更大，如用G-10型得Kd值0.75左右，用G-25型得0.8左右。这是由于一部分水相与凝胶结合较牢固，成为凝胶本身的一部分，因而不起作用，小分子不能扩散入内所致。此时Vi即不能以g·W_R计算，为此也常有直接用小分子物质D₂O，NaCl等通过凝胶柱而由实验计算出Vi值的。另一个解决的办法是不使用Vi与Kd，而用Kav（有效分配系数）代替K_d，其定义如下：
已知

在这里实际上将原来以水作为固定相（V_i）改为水与凝胶颗粒（V_i—V_o）作为固定相，而洗脱剂（V_e—V_o）作为流动相。K_av与K_d对交联度小的凝胶差别较小，而对交联度大的凝胶差别大。
在一般情况下，凝胶对组分没有吸附作用时，当流动相流过Vt体积后，所有的组分都应该被洗出来，这一点为凝胶层析法的特点，与一般层析方法不同。
V_e与分子量的关系：对同一类型的化合物，洗脱特性与组分的分子量有关，流过凝胶柱时，按分子量大小顺序流出，分子量大的走在前面。V_e与分子量的关系可用下式表示：
           V _e=K₁—K₂logMr
K₁与K₂为常数，Mr为分子量，V_e也可用V_e—V_o（分离体积），V_e/V_o（相对保留体积），V_e/V_t（简化的洗脱体积，它受柱的填充情况的影响较小）或K_av代替，与分子量的关系同上式，只是常数不同。通常多以K_av对分子量的对数作图得一曲线，称为“选择曲线”，如图17-5所示。曲线的斜率是说明凝胶性质的一个很重要的特征。在允许的工作范围内，曲线愈陡，则分级愈好，而工作范围愈窄。凝胶层析主要决定于溶质分子的大小，每一类型的化合物如球蛋白类，右旋糖酐类等都有它自己的特殊的选择曲线，可用以测定未知物的分子量，测定时以使用曲线的直线部分为宜。

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