二、实验程序
1.开机设定参数 ,具体操作参照仪器说明 。
2.用DEPC-H2O做空白调零。
3.将RNA样品按一定的比例稀释于DEPC-H2O。
4.混匀样品后在230nm 、260nm、280nm和310nm波长下读数,还可扫描动态吸收图谱。
三 结果与分析
1. 完整的RNA的甲醛电泳可明显地观察到28S和18S两条带(见图3.1),并且28S大约是18S的两倍宽。若两条带不明显, 则说明RNA部分降解,可能的原因是污染了RNase, 或操作剧烈。
2. 定量测定DNA或RNA,应选260nm、230nm、 280nm和310nm波长读数。其中260nm读数用来估算样品中核酸浓度,310nm为背景吸收值。1个OD260值相当于40μg/mLRNA。
样品浓度(μg/mL)=[OD260- OD310]×稀释倍数×40
OD260/OD280的比值用于估计核酸的纯度,OD260/OD230估计去盐的程度。对于RNA纯制品,其OD260/OD280≈2.0,OD260/OD230应大于2。OD260/OD280<2.0可能是蛋白污染所致,可以增加酚抽提;OD260/OD230<2说明去盐不充分,可能是GIT污染所致,可以再次沉淀和70%乙醇洗涤。
图 3 烟草总RNA电泳检测
(A)甲醛变性琼脂糖凝胶电泳图谱
(B) 烟草总RNA普通琼脂糖凝胶电泳图谱
表1 RNA的长度与分子量

