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分子杂交技术
作者:未知 来源:生物秀 时间:2006-8-31

    核酸分子杂交技术是分子生物学领域中最常用的基本技术之一,其基本原理是具有同源性的两条核酸单链在一定条件下(适当温度和离子强度等)按碱基互补原则退火形成特异性双链。根据杂交对象的不同可以分为DNA/DNA的杂交即Southern blotting ;RNA/DNA杂交即Northern blotting。Southern blotting是一种利用放射性标记的探针与靶DNA进行杂交的技术,是以它的发明者E.Southern命名的,即质粒或基因组DNA酶切后经琼脂糖凝胶电泳分离后转到硝酸纤维素滤膜,然后再用32P标记的探针进行杂交的过程。Northern blotting是将RNA电泳分离后转移转硝酸纤维素膜或尼龙膜上,与DNA或RNA探针杂交的一种核酸分子杂交技术。 核酸分子杂交具有高度特异性和高灵敏性,使得核酸分子杂交技术在分子生物学被广泛应用于基因克隆的筛选和酶切图谱制作、基因组中特定基因的定量和定性的检测,基因突变分析以及疾病的诊断等。现在常用的是固-液杂交,即模板DNA固定在固体硝酸纤维素膜或尼龙膜上,而探针游离在杂交缓冲液中的杂交。其一般程序图9所示。

    杂交体系中含标记的探针、转移到膜上的含靶序列的DNA或RNA分子、杂交缓冲液等。

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