一. 实验目的：
通过实验掌握原生质体的获得与培养技术
二. 实验原理：
植物原生质体就是除去了细胞壁的一个为质膜所包围的的裸露细胞，用酶降解法脱去细胞壁的具有活力的原生质体，其在合适的离体培养条件下具有繁殖，分化，再生成为完整植株的能力。利用原生质体便于开展那些因细胞壁存在而难以进行研究的问题，如质膜的表面特性，细胞壁的形成，细胞器的摄取，体细胞的杂交及作为基因式程研究的良好受体系统，通过导入特定基因，获得转基因植株等等。植物原生质体作为一种研究系统，如同在细胞水平上研究某些问题，比在组织、器官或个体水平上有方便之处。
三、实验材料，试剂和仪器
1．材料
无菌烟草叶片
目前已经从高等植物的根、茎、叶、果实、种子等各种组织和器官分离得到原生质体，叶片、愈伤组织和悬浮细胞是容易取材的常用材料，若利用无菌苗可免去表面灭菌的操作步骤避免因条件不适而产生的材料生长的不良影响。
2．试剂
1）酶混合液
按1g材料加入10ml，酶混合液的比例配制。
配制分两步进行：

用重蒸馏水溶解，调pH5.6，定容至10mL，为酶储备液，灭菌备用。
（2）使用时，再加入纤维素酶 R—10     1%
果胶酶 R—10               0.8%
因酶制剂经过高压灭菌处理后会失活，故先将酶储备液灭菌，待用时再将酶制剂按比例加入到第一步已灭菌的溶液内。
（3）一般酶制剂都不太纯，配好后要经3500rpm离心5min，弃去其中杂质，吸取上清液备用。（所用离心管、滴管等均应经过高压灭菌）
2）洗液
CaCl₂·2H₂O            8mmol/L
NaH₂PO₄·2H₂O     2mmol/L
甘露醇                        0.5mol/L
3）Kg培养基
大量无素： 微量元素：
KNO₃                  2500          MnSO₄·4H₂O  10
NH₄NO₃             250              ZnSO₄·7H₂O   2
(NH₄)₂SO₄          134             H₃BO₄                3
MgSO₄·7H₂O    250            KI                        0.75
CaCl₂·2H₂O      900             Na₂MoO₄·5H₂O 0.025
CaHPO₄·H₂O    50              CoCl₂·6H₂O 0.025
铁液： Na——EDTA 37.2
FeSO₄·7H₂O 27.8

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