(4)内参 (看家基因 housekeeping gene)。
(5)DNA污染。
(二)Northern Blot :
原理:RNA经过变性琼脂糖凝胶电泳分离后,转移到硝酸纤维膜或尼龙膜上,经过杂交,分析mRNA的大小及含量。
应用:半定量分析mRNA的含量;确定mRNA分子的大小。
方法:提取组织细胞总RNA→RNA定量→变性胶电泳→转膜→干膜→预杂交→杂交→洗膜→压片→洗片→图像分析
方法:
提取组织细胞总RNA→RNA定量→变性胶电泳→转膜→干膜→预杂交→杂交→洗膜→压片→洗片→图像分析


注意事项:
(1)RNA的完整性。
(2)转膜完全。
(3)探针标记的效率、变性。
(4)防同位素污染。
(5)压片曝光时间。
探针( probe):
定义:核酸探针是指能与特定核酸序列发生特异性互补的已知核酸片段。一般而言,核酸探针带有特殊的标记物。
常用的核酸探针:
(1)双链cDNA ;(2)单链cDNA;(3)合成寡核苷酸;(4)单链cRNA。
探针所携带的标记物应具备的条件:
(1)标记后的探针的分子结构要尽可能与原来的分子结构相同,绝不影响其碱其配对特异性,不影响探针分子的主要理化特性,尤其是杂交特性。
(2)标记探针的检测方法简便、省时、准确可靠、重复性好、灵敏度高。
(3)稳定性好、环境污染少、价廉。

