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RNA 的制备与分析
作者:未知 来源:生物秀 时间:2006-8-30

    RNAzol法的特点:方便、快速、得率高。但所用试剂价格贵,仅适用于小量提取。
    组织中总RNA的Trizol法提取
    1、取新鲜组织约50-100mg,加入1 ml Trizol,室温充分匀浆,静置5分钟。
    2、加入0.2 ml氯仿,振荡15秒,静置2分钟。
    3、4℃,12000g×15分钟,取上清。
    4、加入0.5 ml异丙醇,将管中液体轻轻混匀,室温静置10分钟。
    5、 4℃,12000g×10分钟,弃上清。
    6、加入1 ml  75%乙醇,轻轻洗涤沉淀。  4℃,7500g×5分钟,弃上清。
    7、晾干,加入适量的DEPC水溶解(65 ℃促溶15分钟)。
    8、定量:在紫外分光光度计上测定OD260和OD280。

    RNA样品处理:
    1、变性胶配制
    2、RNA样品处理
    3、电泳
    4、紫外灯观察

    (三)RNA的纯化:
    采用Oligo dT-纤维素,从总RNA中分离出mRNA。该法利用mRNA 3‘末端有Poly(A)的特点,在总RNA流经寡聚(dT)-纤维素柱时,在高盐缓冲液的作用下, mRNA被特异地结合在柱上,当逐渐降低盐的浓度洗脱时,mRNA被洗脱下来。一般而言,经过二次Oligo dT柱后,可得到较高纯度的mRNA。

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