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RNA 的制备与分析
作者:未知 来源:生物秀 时间:2006-8-30

    RNA
        主要由四种核糖核苷酸组成,即腺嘌呤(A)、鸟嘌呤(G)、胞嘧啶(C)、尿嘧啶(U)。
        天然的RNA并不象DNA那样呈双螺旋结构,而是单链线形分子。只有局部区域为双螺旋结构(约占RNA分子的50%)。
        RNA分子中的核苷酸至少75个,多的可达数千个。

    RNA的分类
                                                                                       
    (1)信使RNA(mRNA)
    (2)转移RNA(tRNA)
    (3)核糖体RNA(rRNA)
    (4)小RNA(snRNA)

    常用的RNA分析方法:
    (1)RT-PCR(Reverse Transcription PCR)(反) 逆转录聚合酶链反应
    (2)原位杂交(In situ hybridization)
    (3)Northern Blot
    (4)RNA斑点和狭线杂交
    (5)S1核酸酶作图法
    (6)引物延伸法
    一、RNA的提取与纯化:
       (一)控制RNA酶的活性:
    1、控制污染:
    (1)专用的RNA操作室、专用器械。
    (2)操作时戴口罩、帽子、手套。
    (3)实验用器皿、吸头、离心管应为新的。
    (4)所配制的水溶液,尽可能用DEPC处理。

    2、已污染RNA酶的器具的处理

    (1)在180℃的高温下干烤8小时或更长时间。
    (2)氯仿冲洗。
    (3)双氧水浸泡。
    (4)0.1%DEPC(焦碳酸二乙酯)水浸泡。

    3、常用的RNA抑制剂:
    (1)焦磷酸二乙酯(DEPC):一种强烈但不彻底的RNA酶抑制剂,通过和RNA酶的活性基团组氨酸的咪唑环反应从而抑制酶的活性。
    (2)异硫氰酸胍:最有效的RNA酶抑制剂。在裂解组织细胞的同时,也使RNA酶失活。它既可破坏细胞结构使核酸从核蛋白中分离出来,又对RNA酶有强烈的变性作用.
    (3)氧钒糖核苷复合物:由氧化钒离子和核苷形成的复合物,与RNA酶结合后几乎能完全抑制RNA酶的活性。
    (4)RNA酶的蛋白抑制剂(RNasin):从人胎盘中分离出来,可以和多种RNA酶结合,使其失活。
    (5)其它:SDS、尿素、硅藻土等对RNA酶也有一定的抑制作用。

    (二)RNA的提取:
        常用的RNA提取方法:
    异硫氰酸胍法、盐酸胍法、RNAzol法。

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