(2)EB母液(1mg/ml)
称取一定量的EB溶于无菌水中,室温避光保存
凝胶中浓度为0.5mg/ml
EB为强诱变剂,实验中要防止污染
(3)DNA标准分子量(自制)
片段大小依次为:0.5,1.1,1.6,2.7,3.1,4.1,5.4,9.4和17
单次电泳电样量3~4ml即可,回收电泳加倍
(4)10×Loading buffer(pH7.0)
EDTA 50mM
甘油 60%
Xylene Cyanol FF(W/V) 0.25%
Bromophenol Blue(W/V) 0.25%
(5)无菌双蒸水
(6)琼脂糖
2. 器材
(1)eppendorf管
(2)枪头
(3)移液器
(4)电泳槽
(5)电泳仪
(6)微波炉
(7)电泳板和梳子
(8)紫外投射分析仪
(9)数码相机(带紫外滤色镜和近射镜)
实验步骤
(1) 用1×TAE–Buffer按照被分离DNA分子的大小配制一定浓度(0.7%)的琼脂糖凝胶50ml,在微波炉中加热至琼脂糖溶解。
(2) 待溶液冷却至50℃左右,加入溴化乙锭(贮存液: 用水配制为1mg/ml)至终浓为0.5mg/ml充分混匀。
(3) 用透明胶封固玻璃板两头,在距底板0.5~1.0mm的位置上放置梳子,将温热的琼脂糖凝胶倒入胶模中,凝胶厚度在3~5mm之间。
(4) 在凝胶完全凝固后,撕去透明胶,小心地将玻璃板移至装有1×TAE缓冲液的电泳槽中,轻轻地拔去梳子,且使缓冲液没过胶面约1mm。
(5) DNA样品与10×Loading-buffer(含有溴酚蓝和甘油等物质)混合后,用微量取样器慢慢将混合物加至样品槽中。
(6) 盖上电泳槽并通电,使DNA向阳极(红线)移动,采用电压为80~100V。
(7) 溴酚蓝在凝胶中移出适当距离后切断电流,取出玻璃板,在紫外灯下观查凝胶。
(注:对于DNA片段回收的电泳一般建议采用0.6%低浓度的凝胶,而且采用的电泳液需第一次使用,电泳槽要洗净)


