一、实验目的：

通过不同的试验设计方法，对具较高杀虫毒力的苏云金芽孢杆菌WB7菌株进行摇瓶培养基最优化的研究

二、材料与方法

1  实验室培养基筛选
1.1 供试菌株
苏云金杆菌WB7菌株
1.2 培养基
初筛培养基配方组分如下：


1.3 摇瓶培养与计数
将活化菌种接种到新鲜的LB培养基中过夜，再按1%接种量转接于各供试培养基，摇床振荡培养至30%芽孢脱落。培养条件：250ml三角瓶每瓶装量25ml培养基，灭菌前pH7.2，30℃下180 r/min。
培养后菌液在无菌条件下10倍稀释至10^-7、10^-8、10^-9，并将此3个稀释度在无菌条件下，吸取1ml于无菌平板中，每稀释度重复3个平板。将灭菌后冷至不烫手的平板计数培养基倒入平板中（8-10ml），迅速旋转平板，混匀后使培养基铺满整个平板，凝固后倒置平板于30℃培养18小时后取出。统计菌落数，选择稀释梯度中重复性最强者为试验结果。
1.4 溶解性葡萄糖培养基筛选
用BP、TP、PM、T-3四种初筛培养基进行摇瓶培养，稀释平板计数后，筛选出对WB7生长较有利的培养基组合，并以此为基础培养基，采用L27 ( 313 )正交表来安排试验。正交试验的因子与水平见表1。
1.5 碳、氮、磷的影响
将葡萄糖作为碳源，蛋白胨、酵母膏作为氮源，KH₂PO₄为磷源，应用三因子二次正交旋转组合设计安排试验。各因子的水平编码见表2，组合处理共20个，其中m_c=8，m_r=6，m₀=6。

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