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昆虫病毒包涵体的观察及其他染色法
作者:未知 来源:生物秀 时间:2006-8-29
    一、目的要求:
    昆虫的病原病毒不能采用一般而论的分离培养培养方法,也不能在光学显微镜下观察其病毒粒子的形态,但可以通过染色法后用显微镜观察其病毒的包涵体形态加以识别。
    多数昆虫病毒具有包涵体。这就给我们研究、鉴定、利用超显微形态的病毒提供了极大的方便。本实验就是通过染色法识别几种病毒包涵体的形态,学习掌握初步鉴定病毒。

    二、实验材料:
    1. 滤纸
    2.显微镜
    3.量筒
    4.研钵
    5.水浴锅
    6.酒精灯
    7.显微镜
    8.镊子
    9.载玻片、盖玻片
    10.滴管

    三、实验内容:

    2.  CPV染色:
    (1)染液:吉姆萨1克,中性甘油30ml,甲醇100ml。先将染色粉研碎,加少量甲醇充分研磨使溶解,再加入中性甘油30ml,最后加入全部甲醇,混合后置于60度水浴中1小时,冷却后过滤,即为原液。染色时取一份原液加四份甲醇混匀使用。
    步骤:涂片火焰干燥,用上述染液1分钟,然后加等量蒸馏水冲洗均匀,继续染色30分钟。水洗、吸干、油镜检查,质形多角体被染为紫色。
    用Giemsa染NPV时不着色,因此常用它来进行CPV、NPV的区别染色。
    (2)染液:萘酚兰黑0.1克蒸馏水20ml,100%甲醇50ml、冰醋酸30ml。
    3.  GV染色:
    (1)染液:氨基黑0.1克,溶于50ml蒸馏水中,再加入98%甲醇40ml,冰醋酸10ml。
    方法:涂片自然干燥,加1滴1%苦味酸(1克苦味酸溶于100ml蒸馏水中),再加氨基黑染色液1滴,轻轻混合,并微加热,待有水蒸气冒出时,停止加热,待凉后洗去染色液,吸干涂片,油镜检查,颗粒体呈兰黑色。
    (2)染液:
    Ⅰ 0.1g偶胭脂红G、溶于100ml蒸镏水中,煮沸5min,冷却后加入 2ml冰醋酸,用前过滤。
    Ⅱ  磷酸0.1g,快绿0.2g,苯胺兰0.1g,蒸镏水100ml,G字橘黄0.5g
    4、苏丹Ⅲ染色:用于区别多角体与脂肪球
    染色剂为苏丹Ⅲ的饱和水溶液,涂片经染色10-15min,自来水冲洗5-10sec,干之,而脂肪球染成红色,多角体未着色。
    5、Zielh石炭酸复红染色
    A 液:碱性复红 1g  95%乙醇10ml   
    B 液:石炭酸5g   蒸镏水95ml
    方法:混合二液,涂片用甲醛乙醇固定10min,后用50%乙酸水溶液处理10min,流水冲洗,染色5 min,结果细菌、真菌等为整体着色,而多角体颗粒体边角着色深红色,中间不着色,轮廓清晰。
    6、病毒包含体的碱解:
      制作研究材料的湿片,在盖片边缘加1滴NaOH,使碱液流向较干处,在400倍显微镜下观察。当碱液流过时,大多数病毒包含体将肿大而溶解,颗粒体病毒的荚膜的肿胀不易看清,而多角体病毒包含体看得十分清楚。
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