一、DNA Southern Blot及杂交
本技术可用于基因组DNA特定序列定位，尤其可分析某些基因的限制性内切酶长度多态性，对遗传性疾病的早期基因诊断、产前诊断或基因变异等方面的研究有应用价值，其过程包括：样品DNA内切酶水解、水解片断的琼脂糖凝胶电泳分离、分离后水解片断的转移(固定)、特异性DNA片断的分子杂交及放射自显影。
(一)样品DNA内切酶水解
限制性内切酶(RE)可裂解双链DNA，每种酶其特点是具有高度特异性的DNA裂解点和不同电离子强度的特殊反应条件。不同产品其反应条件不同，应根据说明书操作。单位(U)RE活性是在37℃ 1小时内能将1μg DNA所有特异性位点切断的酶用量。若用两种以上不同的内切酶，要注意RE的最适盐浓度，要由低向高逐级添加适量盐逐个进行DNA切割。
1、配液：10×限制性酶消化缓冲液
   10×buffer O—无盐：100mmol/L Tris HCL pH7.4
                       1mg/mL BSA
                       100mmoL/L MgCL₂
                       10mmol/L DTT(二硫苏糖醇)
   10×bnffer L—低盐：缓冲液O 
                       0.5mol/L Nacl
   10×bnffer H—高盐：缓冲液O 
                       1.0mol/L Nacl
2、操作步骤：
(1)将DNA(0.2～1.0μg)溶液加入EP管中,并加入适量H₂O总体积为18μL，混匀。
(2)加入2mL 10×限制酶缓冲液，根据厂家建议的盐浓度选择不同的缓冲液。
(3)加1～2U限制性内切酶充分混合。
(4)37℃温育适当时间，时间需先进行预试验，摸索所需消化的时间，通常用琼脂糖凝胶电泳鉴定，酶解充分，各片断分子量从大到小分布均匀。
(5)加入0.5mol/L EDTA pH8.0使达到终浓度为10mmol/L终止反应。
(6)消化后的DNA直接进行琼脂糖电泳，方法同前，可用于分析或Southern Blot。
(二)Southern Blot及杂交。
将经电泳走在琼脂糖中的DNA变性、中和后，以毛细管作用在高盐缓冲液中转移至硝酸纤维膜上，再用放射性探针检测与之杂交的DNA。
1、配液：
  (1)变性溶液：1.5mol/L Nacl 0.5mol/L NaoH
  (2)中和溶液：200mL  20×SSC
               100mL  1mol/L HCL
               100mL  1mol/L Tris HCl pH8.0加水至500mL。
  (3)20×SSC： 在800mlH₂O中溶解175.3g Nacl和88.2g柠檬酸钠，加入数滴10mol/L NaoH调pH至7.0加水至1000ml，高压消毒灭菌。
  (4)预杂交液：12.5mL  1mol K₃ PO₄ pH7.4
               125mL   20×SSC
               25mL    100×Denhardt’S溶液
               5mL     5mg/mL鱼精DNA
               250mL   100%去离子甲酰胺
               82.5mL   H2O(总体积为500mL)
  (5)100×Denhardt’S液：10g聚蔗糖(Ficoll400)
                         10g聚乙烯吡咯烷硐 
                         10g牛血清白蛋白(组分V)
                         加H2O至500ml
2、操作步骤(如图20-1)： 
 

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