麦苗接种后，保湿阶段要求的最适温度，条锈为9～13℃，叶锈为15～20℃，秆锈为18～22℃。自保湿桶中取出放入温室后平均温度最好分别控制在16～18℃（条锈），18～22℃（叶锈），21～24℃（秆锈）。光照时间每天应不少于12h，冬季光照不足，需每天增加一定时间的人工辅助光照。上述的温度和光照掌握的好坏是发病充分与否的关键。
在分别接种不同生理小种进行鉴定时，接种用的一切用具都要先行消毒，防止可能发生的污染，影响鉴定结果。
（2）喷粉法 小喷粉器经消毒、干燥后，加入适量的干燥滑石粉，再加入少量新采集的锈病孢子，混合均匀待用（滑石粉与孢子的比例约为20～30：1）。接种用的锈病孢子应事先去除混在其中的杂质，以防喷粉时造成喷粉器堵塞。开始接种前，先将已去除叶片蜡质的盆栽麦苗，放入保湿桶内，用喷雾器在麦苗上均匀喷上雾滴，随即用喷粉器将上述稀释的孢子粉均匀地喷洒到每盆麦苗的叶片上，再用喷雾器喷雾，使麦苗和保湿桶内壁都沾上水滴，掌握水滴不下滴为度。最后盖上塑料薄膜，保湿阶段和以后各项操作及注意事项同前述。
（3）喷雾法 用小型喷雾器将制备好的新鲜孢子悬浮液（在喷雾器内，加入要接种的锈菌孢子，先用少量清水湿润后，搅成糊状，再加入足量的水至淡桔黄色即可）喷在叶片已去蜡质的麦苗上，接种后将麦苗放于保湿桶内保湿，以后的操作及注意事项同前述。
喷粉法及喷雾法适于对大量材料的接种鉴定。
2．成株接种 成株接种多在田间进行，其方法是在待鉴定抗病力的品种或育种材料的四周播种高度感染锈病的品种作为锈病鉴定的诱发行。为了造成发病的环境，以得到可靠的鉴定结果，常需要在诱发行上每隔一定距离的麦苗上进行人工接种，以造成锈病的发病中心。用于接种的锈病孢子应是当地流行的优势小种，可以是一个小种，也可以是几个优势小种孢子混合。接种的方法如下：
（1）喷粉法 接种前，用手沾清水将叶片拂擦数下，以去掉叶片蜡质，然后用喷雾器喷上雾滴，用喷粉器将由滑石粉稀释好的孢子粉喷于麦苗上，再用喷雾器喷上水雾，随即用小花盆或塑料薄膜覆盖保湿，历时24h揭开。此法多用于麦苗起身前后。
（2）注射法 此法多用于麦苗有一定生长高度的拔节期。接种前，应配制好孢子悬浮液，配制方法同前，于显微镜400×视野中平均有10～20个锈菌孢子数为适宜浓度。一般在诱发行上每隔1m左右选取3～5个单茎分别注射接种。其方法是用注射器将孢子悬浮液从小麦心叶与其下的展开叶叶鞘相接处以下约1cm处注射，针头易向下倾斜刺入，但不要刺穿，挤压少量悬浮液，以见到心叶处冒出水珠为度。孢子一般悬浮于液面，所以孢子悬浮液必须随用随搅拌或震荡。田间接种注射最好在阴天的傍晚进行。如天气干旱，接种后在接种点上浇水1～2次，也可以在接种前或接种后适当灌水，以提高田间湿度，利于锈菌孢子萌发、侵染和发病。
除上述二种方法以外，还可以用喷雾法，即将配成的孢子悬浮液喷在诱发行上进行接种。接种后为了有利于锈病孢子萌发、侵染，也要进行保湿。
接种后，约二周后即可发病。但成株的抗病性鉴定一般在小麦乳熟期以后，锈病发展到高峰时进行，每个品种逐个进行调查记载。
（二）抗锈性鉴定
1．幼苗鉴定
衡量小麦品种对锈病的抗病和发病程度，常用到反应型（感染型）、严重度和普遍率三个指标。幼苗期鉴定一般考察其反应型。反应型是指植株受病菌侵染后的保卫性反应，可以用过敏性坏死的有无强弱，孢子堆能否形成，孢子堆的大小、多少等来判断。小麦品种对条锈菌的反应型可分为6级，分级标准如表5－1所示。
2．成株鉴定
（1）反应型：同幼苗鉴定。
（2）严重度：即病叶上着生孢子堆部分占整个叶片面积的百分率，用于表示病害发生的严重程度。从理论上讲，应将小区内的每一叶片都进行统计而后取平均值。但在实际工作中，往往因人力不足，而仅采用目测估计法。总体上目测评定叶片的发病情况，估计出发病的严重程度（严重率）。目前严重率分级标准尚不统一，但多数采用以下7级分级标准：
级别 孢子堆占叶面积的百分率（严重率）
0 无孢子堆
1 孢子堆占叶面积<5%
2 孢子堆占叶面积5～10%
3 孢子堆占叶面积11～25%
4 孢子堆占叶面积26～40%
5 孢子堆占叶面积41～65%
6 孢子堆占叶面积>65%
然后计算严重度，计算公式如下：
（3）普遍率：指病害发生的普遍程度，即发病叶片数占调查总叶片数的百分数率。
普遍率＝发病叶片数/调查叶片总数×100%
在实际工作中，一般也采用目测估计法进行观测。要求较精确鉴定时，可根据被鉴定材料小区面积的大小，随机选取30～60叶进行观察记载。
