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组织DNA的提取和纯化
作者:未知 来源:生物秀 时间:2006-8-21
    [原理]
         本法用含EDTA的溶液洗涤细胞,SDS(十二烷基硫酸钠)破碎、裂解细胞,消化蛋白质,使核蛋白解聚并使细胞内的DNA酶失活,用酚、氯仿变性蛋白质并去除杂质,最后用乙醇沉淀得到纯化的DNA。

    [试剂]
    1. 裂解缓冲液
    2.苯酚-氯仿溶液
    3.氯仿-异戊醇溶液
    4.冰无水乙醇及70%乙醇
    5.TE缓冲液
    6.5mol/L NaCl

    [操作]
    1.处死小白鼠一只,取新鲜肝脏,用生理盐水清洗去血水。
    2.每克组织加10ml裂解液制成匀浆。
    3.取2ml匀浆于离心管中,加等体积苯酚-氯仿溶液,加盖,缓缓来回颠倒5min,                
    离心2500rpm×10min。
    4.取上层水相,加等体积氯仿-异戊醇溶液,加盖,缓缓来回颠倒5min,离心 
    2500rpm×10min。
    5.取上层水相至玻璃管内,加5mol/L NaCl至终浓度为0.3mol/L(2ml+100ul,3ml+150ul)。
    6.加2.5倍体积的冰无水乙醇,加盖,缓慢摇匀,见白色絮状沉淀DNA出现。
    7.用玻棒捞起DNA沉淀置于试管中,用1mLTE溶解。
    8.定量
           吸取DNA溶液100ul+2.9mlTE(30倍稀释),在260nm和280nm下读
       取吸光度值,
    9.计算
           DNA浓度(ug/ml)=A260nm×50×1/光径×稀释倍数
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