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PCR技术的原理与方法
作者:未知 来源:生物秀 时间:2006-8-18

    六.差别PCR(differential PCR)

    差别PCR是将靶基因与已知拷贝的参照基因置于同一PCR反应体系中,用同一套引物进行扩增,电泳染色后可根据参照基因的扩增产物与待测基因扩增产物的相对丰度对待测基因进行定量。

    七.原位PCR(In situ PCR)

    原位PCR是指在组织或细胞标本片上直接进行PCR,对细胞中的靶DNA进行扩增,通过掺入标记基团直接显色或结合原位杂交进行检测的方法。可分为直接法和间接法。

    基本步骤:组织切片或细胞固定→蛋白酶消化→原位PCR扩增→冲洗→产物检测
    优点:灵敏度高,可进行细胞内定位

    八.荧光定量PCR(FQ-PCR)
    荧光定量PCR:融汇PCR技术、DNA探针杂交技术(标记有荧光报告基团和荧光淬灭基团),结合先进的光谱检测技术发展起来的一项新技术。
    主要原理是在待扩增区域结合上DNA探针,PCR过程中,具有5’→3’外切酶活性的Taq酶延伸引物链到DNA探针时,将DNA探针逐个降解,释放出荧光报告基团,这样PCR体系中荧光的强度与PCR产物量之间存在正比关系,可通过测定荧光强度而对PCR产物定量。

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