•三.引物二聚体的形成
1.检查引物的序列
2.提高退火温度
3.调整引物与模板浓度
4.增加引物长度
• 四.假阳性结果的预防
1、实验器材应一次性使用(吸咀、PCR管)
2、注意操作环境，戴一次性手套
3、严格PCR操作规程
4、多次取样的试剂应分装
5、设置阴性对照和阳性对照
PCR相关技术
一.锚定PCR(anchored PCR)：
•引进锚定引物，可以帮助克服序列未知或序列未全知的障碍。
•在DNA3’-末端加上poly(dG)尾，与此相对应的锚定引物poly(dC)一般应在十二聚以上。
二.不对称PCR(asymmetric PCR)
不对称PCR主要是在PCR体系中设计不同的引物浓度，两条引物浓度比为1：50或1：100，前12个循环两条模板等量扩增，之后低浓度引物消耗殆尽，其扩增产物减少以至于无；而高浓度引物介导产生的扩增产物（即单链DNA）逐渐增加，可得到大量单链DNA（ssDNA）用于直接测序。
三.反向PCR(inverse PCR)
四.多重PCR(multiplex PCR)
多重PCR是用多对引物同时对模板DNA上的多个区域进行扩增。
多重PCR技术的难点不是在于其原理和操作的复杂性，而是在于其多对引物的设计，必需保证多对引物之间不形成引物二聚体，引物与目标模板区域具有高度特异性。
应用于基因诊断，对与疾病相关的基因（庞大）进行扩增检测。
五.逆转录PCR(reverse transcription PCR,RT-PCR)
•由mRNA逆转录产生cDNA链作为PCR反应模板。
•逆转录合成cDNA时，引物可选用特异引物、随机六聚体引物或寡聚dT(12-18)。
•设计RT-PCR的引物时最好是分散在不同的外显子上，以免基因组DNA的污染导致假阳性结果
