（一）试剂
1. 30%丙烯酰胺
        丙烯酰胺                    29 g
       N，N’-亚甲双丙烯酰胺        1 g
       蒸馏水                    100 ml
        加热至50℃搅拌溶解，于4℃保存。
2．10%SDS：蒸馏水配制，室温保存。
3．10%过硫酸铵：蒸馏水配制，4℃保存，一周内使用。
4．TEMED（N，N，N’，N’-四甲基乙二胺）
5．1.5mol/L Tris-HCl（pH8.8）和1.0mol/L Tris-HCl（pH6.8）
6．电泳缓冲液
        25 mmol/L    Tris-HCl（pH8.0）
        250 mmol/L   甘氨酸
        0.1%         SDS  
7．电泳加样缓冲液
        50 mmol/L    Tris-HCl（pH6.8）
        50 mmol/L    二硫苏糖醇（DTT）
        2 %          SDS  
    1 %          溴酚蓝
    10 %         甘油

（二）操作
    1．将玻璃板和垫片依次用5%的KOH甲醇溶液、去污剂和清水洗涤，晾干。将无凹口的玻璃板平放在桌面上；将垫片两面涂少许凡士林后，排放在玻璃两侧，再将有凹口的玻璃板在垫片上放置妥当。将玻璃夹层推至桌沿，用胶带纸封闭三个侧面，留出有凹口的一面不封闭。
    2．使玻璃夹层竖立，有凹口面朝上。根据所需的凝胶浓度和用量，按表7-1的比例配制分离胶溶液
    3．一旦加入TEMED，混匀后立即小心将分离胶注入准备好的玻璃板间隙中，为积层胶留有足够空间。用吸管轻轻在其顶层加入几毫升异丁醇，以阻止空气中的氧气对凝胶聚合的抑制作用。
    4．聚合完成后（约30～60分钟）后，倒掉覆盖液体，用蒸馏水洗凝胶上部数次，尽可能用吸水纸吸干凝胶顶端的残余液体
    5．根据所需用量，按表7-2的比例配制积层胶溶液。
6．注入积层胶溶液，插入梳子，小心避免气泡，垂直放置于室温下。
7．在积层胶聚合完成（约30分钟）后，小心拔掉梳子。用蒸馏水冲洗梳孔以除去未聚合的丙烯酰胺。
8．将凝胶放入电泳槽中，上下槽均加入1×电泳缓冲液，检查是否泄漏。驱除两玻璃板之间凝胶底部的气泡，即可上样。

表7-1   配制SDS-PAGE凝胶电泳分离胶浓度与所用溶液量