实验步骤
以下均需无菌操作
    （一）感受态细胞的制备
    1. 大肠杆菌DH-5a 冷冻保存的菌种，挑取一环，划线接种在LB固体培养基平板上（活化菌种），37℃培养过夜（约16小时）。
    2. 从长好的平板上挑取一个单菌落，转接在含有3ml LB液体培养基的试管中，37℃振荡培养过夜（约16小时）。
    3. 取0.3ml菌液接种于20ml LB液体培养基的250ml三角瓶中，37℃振荡培养2～3小时，待OD₆₀₀值达到0.3～0.4时，取下三角瓶，立即置冰浴10～15 分钟。
    4. 将细菌转移到一个灭菌的50ml离心管中，4℃ 3000r/min离心10分钟，弃去上清液（尽可能将所有的上清液去净），收集菌体。
    5. 加入20ml用冰预冷的0.1mol/L CaCl₂溶液，重新悬浮菌体，使菌体分散均匀，置冰浴中30分钟。
    6. 4℃ 3000r/min离心10分钟，弃去上清液（尽可能将所有的上清液去净）。
    7. 再加入2ml用冰预冷的0.1mol/L CaCl₂溶液，小心重新悬浮菌体（操作要轻）。在4℃冰箱中放置12～24小时，即可应用于DNA转化。
    （二）细菌的转化
    1. 取大肠杆菌DH-5a新鲜感受态细胞100ml于1.5ml Eppendorf管中，加入50～100ng质粒pUC118 DNA，轻轻旋转以混合内容物，在冰浴中放置30分钟。
    2. 42℃热休克120秒，不要摇动Eppendorf管。
    3. 加入LB液体培养基900ml，37℃保温60分钟。
    4. 取100ml转化液涂布在含氨苄青霉素（Amp）100 mg/ml的LB固体平板上，37℃倒置培养16～24小时。
    5．观察平板，长出的菌落可能就是转化子，可进一步提取质粒鉴定。
 
【提示】
    实验操作中注意的问题
    1. DNA与感受态细胞混合后，一定要在冰浴条件下操作，如果温度时高时低，转化效率极差。
    2. Eppendorf管盖紧，以免反应液溢出或外面水进入而污染。
    3. 42℃热处理时很关键，转移速度要快，但温度要准确。
    4. 涂布转化液时，要避免反复来回涂布，因为感受态细菌的细胞壁有了变化，过多的机械挤压涂布会使细胞破裂，影响转化率。

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