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细菌感受态的制备和质粒的转化
作者:未知 来源:沈阳药科大学 时间:2006-8-10

    实验目的
        通过实验学会感受态细胞的制备方法和DNA转化的最基本操作,以及如何提高转化效率的思路。本实验综合因素较多,难度较大,是分子生物学中的一个很关键的实验手段。
     
    实验原理
        转化是指某一细胞系由于接受了外源DNA,而导致其原来的遗传性状发生改变,这种遗传性状包括遗传型和表型的改变。
        感受态是受体菌能接受外源DNA能力的一种生理状态。用CaCl2处理细菌,改变细胞膜的结构,使质粒DNA能够穿过细菌细胞膜进入细胞。然后在选择性培养基中培养转化处理过的细菌,转化成功的细菌可以在选择性培养基上生长形成菌落。
     
        本实验采用质粒pUC118转化大肠杆菌DH-5a,通过氨苄青霉素抗性筛选转化子。

    1-1  质粒pUC118/pUC119
    图谱
    实验材料和试剂
        (一)实验材料
        大肠杆菌DH-5a
        质粒pUC118(ampicillin,AmpR)
        (二)培养基和试剂
        1. LB液体培养基(%)
           胰蛋白胨(Tryptone)               0.5
           酵母浸出粉(Yeast extract)          1.0
           NaCl                               0.5
           pH  7.2~7.4(用2mol/L  NaOH调节)
          (分装:20ml/250ml三角瓶,每组2瓶。3ml/试管,每组2管。0.07Mpa高压灭菌30分钟)。
        2. LB固体培养基
           LB液体培养基加入1.6%的琼脂粉即可。
          (分装:50ml/250ml三角瓶,加入0.8克琼脂粉,每组1瓶。0.07Mpa高压灭菌30分钟)。
        3. 抗生素:氨苄青霉素(ampicillin,,Amp),配制成100mg/ml备用。   
        4. 0.1mol/L CaCl2溶液
           (配制方法:称取1.1克无水CaCl2,溶于90ml蒸馏水中,定容至100ml,装于250ml三角瓶中,0.07Mpa高压灭菌30分钟,4℃保存。)

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