上皮细胞之间都有特征性的紧密连接(桥粒)结构,因此可以通过观察培养细胞的超微结构来判断细胞的类型,如果有紧密连接,就必然是上皮细胞。这是一锤定音的证据。注意不要把细胞消化下来做电镜,要用细胞刮刮下来后做电镜。
此外每一种上皮细胞都有其特征的细胞角蛋白的表达(cytokertin, CK),可以查一下子宫内膜腺上皮细胞表达的CK分子,然后进行免疫细胞化学的鉴定。
,细胞在偏碱的情况下培养,耐受能力会逐渐下降,可能是产生脱壁现象的原因,后来我重新测了一下培养基,为7.5左右,我用灭菌的HCL调了一下,培养基颜色变成淡红透亮,再次培养,发现细胞贴壁比较好了,搏动效果也不错,因此,我以后每次培养前都要重新调好PH值,我觉得很多因素是能影响PH值的
血清质量不好,影响了细胞生长。所以,我认为以后养细胞,用的血清浓度最好是每批次血清都摸一下,不一定要以参考文献为准,毕竟国产的血清质量差异比较大啊。
细胞无菌操作是关键,对于配制培养液时,有些人为了让培养粉充分溶解,搅拌4小时或更长时间。其实这完全没有必要,一般培养基的固体组分还是易溶于水的,搅拌的时间长了会增加污染机会,虽然后来滤过除菌了,但细菌的代谢产物比如脂多糖谁能够把它滤掉?细菌的代谢是很快的,甚至在常温下20min就可以繁殖一代,太可怕了。我的经验就是搅拌30min-60min就把它过滤。
另外关于培养基的pH问题,一般按照说明书操作,加入所说的NaHCO3量,与预计的pH不会有什么距离,也就是说基本上不用调pH,如果相差大,要考虑三蒸水的质量是否有所下降,当然这时调pH也是不得已而为之。我配培养基时基本上不调pH,只是用试纸检测一下pH,观察一下培养基的颜色。
(1)东西一定要用自己的。既不要借别人的,也不要借给别人。可能大家觉得比较自私。实际上还是很有好处的。并不是每个人的操作都规范,因此相互之间串着用,很容易造成交叉污染。
(2)我习惯口对口倒液体,在倒前倒后都要在酒精灯上过一下。自己认为比起用吸管吸更能很好的防止污染。步骤越简单,越能防止污染。而且还能节省很多吸管。
(3)一次将所有的所需要试剂、工具放入工作台。不要做到半路,又出工作间拿东西,这样增加了污染的机会。
(4)整个操作要快、动作要轻、而且不要干其他的事情。比如手机响了,最好不要接。我一般操作的时候将手机关了,手机声音响起,好烦躁。
(5)我一般开紫外线照射台的时候,就将培养基、酶、DHANKS液那到室外让它自然升温。这样40分钟后,温度也升上来了。有很多人将他放到37度水浴锅里加热。一定要注意水浴锅的卫生,有的常年不清洗,里面很脏,容易在外面瓶身上吸附大量细菌。因此用它的也一定要勤换水。从水域锅那出后,最好找个毛巾插干上面的水。
(6)操作前要洗手,用75%酒精搽手。用完操作台,要打扫卫生。
细胞要经常冻存,我一般只要细胞状态好就将细胞冻存起来。细胞状态差了,扔掉,重新复苏。这是一个必须养成的习惯。毕竟很多情况下,细胞并不是因为污染了,才让你感到头痛。这样你不会担心没有种子了。我一般是不加双抗的,只要注意,不会污染。
过滤时不要用枪吹细胞!! 如果用力吹,筛网就像刀片一样,把你的细胞全部切碎!!
.刷玻璃器皿的过程:初洗、泡酸(一天)、自来水冲洗(10遍)、纯化水冲洗(3遍)、注射用水冲洗(3遍)。感觉过于苛刻,自来水只冲洗3遍。被老师发现后,一阵痛批,才知道这是极其关键的一步,残留的酸可能会抑制细胞生长,甚至导致细胞死亡,痛失辛苦得来的细胞,心血付之东流。无知不能无畏,一定不能大意。


