(2)培养细胞
①单层培养细胞
i.吸出培养基用5ml~10ml冰冷的PBS洗细胞一次。
ii.吸出PBS加入溶液D覆盖细胞，90mm培养皿加2ml (60mm培养皿加1 ml)。
iii.将细胞溶解物转移至管中。
iv.用匀浆机室温下匀浆15s ~30s。
②悬浮培养的细胞
i.室温下1000r/min~3000r/min离心5min~10min收获细胞。
ii.吸出培养基将细胞重悬于1ml~2ml冰预冷的PBS中。
iii.离心收获细胞，彻底吸尽PBS，加2ml溶液D。
iv.用匀浆机室温下匀浆15s ~30s。
2．将混合物移至一管中，在每毫升溶液D中立即加入0.1ml 2mol／L的醋酸钠 (pH4.0)，1m1酚，0.2m1氯仿—异戊醇。加入每种组分后，盖上管盖，倒置混匀。
3．将匀浆剧烈振荡10s。冰浴15min使核蛋白质复合体彻底裂解。
4.10000r／min用4℃离心20min，将上层含RNA的水相移入一新管中。
5.加入与提取的RNA等量的异丙醇,充分混合液体，并在-20℃沉淀RNA lh或更长时间。
6.10000r／min用4℃离心30min，收集沉淀的RNA。
7. 轻轻倒出异丙醇加入溶液D溶解RNA颗粒，每1ml第一步所使用的溶液加0.3m1溶液D。
8. 将溶液移至一微量离心管，涡旋混匀，并在-20℃用等量异丙醇沉淀RNA 1h或更长时间。
9. 在微量离心机上，于4℃ 12000r/min离心10min收集RNA沉淀。用75%的乙醇洗涤沉淀2次，重复离心。用—次性使用的吸头吸出残存的乙醇。将离心管盖打开,在实验台放置几分钟，以便乙醇蒸发。RNA不可完全干燥。
10. 加50µl ~100µl DEPC处理过的水使RNA沉淀溶解。将RNA溶液贮存于-70℃。
11. 用紫外分光光度法或地衣酚显色方法检测RNA含量。详见本实验第二部分。
【实验结果讨论】
1．提取的DNA若有一定程度的解聚，不会影响鉴定。
2．用上述方法所得到的是组织或细胞中的总RNA，若要得到mRNA须利用大多数真核生物mRNA3，带有多聚腺苷酸残基的特点，使其通过挂有寡聚d（T）的纤维素亲和而纯化。
【思考】
在提取核酸过程中，要注意哪些问题？
