1. 组织样品和培养细胞的裂解
（1）组织样品
① 将lg新鲜切取的组织在液氮中速冻，并用液氮预冷的研钵研磨。
② 液氮挥发，将组织粉末一点一点地加入盛有10倍体积裂解液的烧杯中，使其分散于裂解液表面，后振摇烧杯使粉末浸没。
③ 将悬液转移至50ml三角瓶中，并于37℃温育1h，立即进行步骤1.2.。
（2）培养细胞
①单层培养细胞
i.从孵箱中取出长满单层细胞的培养皿，迅速吸去培养液，用冰冷的TBS洗2次，加入1ml新鲜的冰冷的TBS。
ii. 用橡胶刮棒将细胞刮入1ml TBS中，用吸管将细胞悬液转移到冰上的离心管中。用0.5 ml冰冷的TBS冲洗培养皿，后并入离心管的细胞悬液。
iii.于4℃3000r/min离心10min以收集细胞。
iv. 将细胞重悬于5倍~10倍体积的冰冷TBS中并再度离心。
v. 用1 ml TE（PH8.0）重新悬浮细胞，转移至50 ml三角瓶中。
vi. 每毫升细胞悬液加10 ml裂解缓冲液，于37℃温育1h，立即进行步骤1.2.。
②悬浮培养的细胞
i.将细胞转移至离心管，于4℃3000r/min离心10min以收集细胞，吸去上清。
ii.用1倍体积冰冷的TBS重悬细胞并再度离心，吸去上清，小心地再次重悬细胞于冰冷的TBS中，离心收集细胞。
iii.去上清，用1ml TE（PH8.0）重新悬浮细胞，转移至50 ml三角瓶中。
iv.每毫升细胞悬液加10 ml裂解缓冲液，于37℃温育1h，立即进行步骤1.2.。
2.将裂解液转移至离心管中，裂解液不能超过1/3体积。
3.加入蛋白酶K（20mg/ml）至终浓度100µg/ml。用一灭菌玻璃棒温和地将酶混入细胞裂解液中。
4.将细胞裂解液置于50℃水浴中保温3 h，并不时振摇。
5.将溶液冷却至室温，加入等体积的平衡酚，将离心管置于涡旋器上,使离心管缓慢颠转10min 以温和地混合两相。
6.室温下，6500r/min离心15 min以分离两相。
7.用宽口移液管将黏滞的水相转移至另一离心管。
8.苯酚抽提两次，收集水相。
9.加入0.2倍体积10mol/L醋酸铵及2倍体积无水乙醇，旋转离心管直至溶液彻底混匀为止。
10.DNA随即形成沉淀，在室温下6500r/min离心5 min，收集沉淀。
11.用70%乙醇洗涤DNA沉淀2次，按步骤1.10.离心收集DNA。
12.尽可能吸去残余乙醇,于室温下，将DNA沉淀置于敞开的管内，直至乙醇挥发殆尽。
13.按每0.1m1细胞(步骤1.1)加入1ml TE溶解DNA，将DNA溶液储存于4℃。
14.用紫外分光光度法或二苯胺显色法检测DNA含量。详见本实验第二部分。
(二)酸性酚-硫氰酸胍-氯仿提取法纯化组织和细胞中的RNA
1．组织样品和培养细胞的处理
(1) 组织样品
① 分离组织在液氮中速冻。
② 将冰冻的组织放入塑料袋中，用锤子砸碎。
③ 将组织碎末移入含3ml溶液D的管中。
④ 用匀浆机室温下匀浆15s ~30s。
