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常规病理标本的制作程序
作者:未知 来源:生物秀 时间:2006-8-8

    5.可用来保存标本。大体标本经福尔马林固定后,如为了陈列保存,必须取出冲冼。然后移入75%的酒精中。如果用福尔马林作陈列标本的固定液,则因为福尔马林含有杂质较多,液体容易酸化,时间一长,会逐渐变为微黄色或淡黄色,影响美观,影响陈列的效果。
    6.可与其它试剂配成多种的混合固定液,有时为了加快固定,常采用酒精和其它试剂来配成混合固定液,这种固定液在固定的同时,兼有对组织脱水的作用。应用酒精配成的混合固定液有:
    ①Carnoy氏固定液
    氯仿     300ml
    冰醋酸    100 ml
    95%酒精       600 ml
    该固定液固定组织快速,在固定的同时兼有脱水的作用。溶液中的氯仿和酒精,对组织的收缩较厉害,但应用了冰醋酸,这种现象便被中和去。
    ② AF固定液
    甲醛   100 ml
         冰醋酸   50 ml
    95%酒精     850 ml
    这种固定液的作用与上液有相似之处,但要注意的是,凡使用含有醋酸的固定液,其脱水用具不能使用铜制的脱水盒,因冰醋酸跟铜离子起反应,生成醋酸铜,这种物质可沉淀于组织间,可破坏组织中的抗原,造成免疫组化检测的失败。应用时应多加注意。
    酒精也有许多不足之处,它的缺点是:
    1.可溶解脂类物质,凡要证明组织是否含有脂类和类脂物时,切不能用含有酒精的固定液去固定组织,也不能用石蜡切片,因为酒精可将它们溶解去,而石蜡切片组织中含有的脂类物质,则在组织脱水时被溶解去,只留下脂类或类脂物所占有的空间。
    2.对组织收缩较大,不宜作单纯固定液。高浓度的酒精,对组织有显著的收缩作用,造成组织发硬易脆,难以切片等现象。因此,它不作为单纯的固定液。
    3.渗透力不强。当用酒精固定组织时,组织表面很快就被固定,并形成了一层蛋白膜,这层膜可阻挡固定液向里渗透,造成了中间组织固定不佳的现象。
    4.可沉淀白蛋白、球蛋白和核蛋白,凡经酒精固定的组织,核的染色都不好。
    5.可脱去切片上已着染的各种颜色,切片经染色后,一是必须洗去多余的染液,二是必须脱去切片上的水。在用酒精洗切片时,必须仔细地掌握显微镜下观察,还要掌握酒精的浓度,低浓底的酒精脱色力强,稍不注意,便可脱去切片上大部分的颜色。切片脱水时,要较快地通过低浓度的酒精,以免使已着染的颜色被脱去。
    6.价格较贵。从经济学的角度,应用酒精固定组织划不来,例如:一瓶500ml的甲醛,可配成500ml的固定液,按每例标本需要100ml计,可固定50例标本,而一瓶 500ml的酒精,即使配成80%
    酒精,也只能固定6例标本,因此,若用酒精固定组织,其价格比用甲醛固定组织的要高8倍。
    (1)冰醋酸。冰醋酸为无色透明的液体,易挥发,气味大,一打开瓶盖,整个文章都可闻其味道,纯醋酸在17℃时常为结晶状,因称为冰醋酸,在冬天使用时,可用微波炉进行解冻,再行使用,它的优点有:
    1.能迅速固定染色质,助于染色,用醋酸配成的固定液,其作用快,固定效果均匀,对于染色质的固定快,因此,用其作固定的切片染色好,在配其它染色液如明矾苏木素和伊红时,常常需加入一定量的醋酸,以促进染色。
    2.能使组织尤其是富含纤维的组织膨胀。
    各种固定液对组织都有收缩的作用,尤其是对富含纤维的组织。而它不但不会使组织收缩,而且还会令许多组织发生膨胀的作用。根据这个特点,用它配成许多种不同的混合固定液,以达到固定好,收缩少,易切片,效果好等目的。用它配成的混合固定液有:
    (1)Zenker氏固定液:[6]
    重铬酸钾    25G
    升汞  50G
    蒸馏水    1000ml
    冰醋酸     50ml
    先将重铬酸钾和升汞溶于水中,尢其是重铬酸钾,应用热水或加温的方法将其溶解,然后过滤贮存于带盖的玻璃瓶中,如暴露于空气中,该溶液将会被慢慢氧化而便颜色加深,导致失效。临用时,取贮存液950ml,加入50ml的冰醋酸,即可使用。
    应用该固定液固定的组织,一般不要超过24h,取出组织,流水冲冼12小时以上,然后保存于75%-80%的酒精中,在切片染色前,必须用碘除去汞盐的沉着。应用该固定液的组织,细胞核及细胞浆染色十分清晰,特别是要显示骨骼肌的横纹时,应用本液可获得满意的结果,但由于其含有醋酸,故不能用于保存细胞颗粒,红细胞及含铁血黄素。

    (2)Flemming氏液
    2%酸水溶液    200ml
    1%铬酸水溶液   700ml
    冰醋酸       100ml
    该液中的奥酸对脂肪组织既有固定作用,又有染色作用,对有髓神经纤维也有固定兼染髓鞘的作用。如果做HE的染色,该液不适合。应用该液固定的组织,切片不能太大过厚,一般1-2毫米厚固定时间1-3天,后经水洗,保存于80%酒精中,除上述两液体外,还有Bouin氏液和Carnoy氏液等。冰醋酸也有许多不足之处:
    1.不能作为单一的固定剂。冰醋酸在实际应用中,常被作为添加剂来使用,如许多种固定液,都加入了冰醋酸。另外,在苏木素和伊红染液中,也常加入了冰醋酸。
    2.不能凝固蛋白质,不能保存白细胞颗粒,红细胞及含血铁黄素等。
    3.价格较贵。

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