6..可长期存在于固定过的组织上.有人做过实验,组织用甲醛固定后在流水中冲洗5小时后,仍留有相当多的甲醛与蛋白质相结合,但需要经过长时间的流水冲洗(24天的冲洗)方能除去.可见存在于组织上的甲醛是不可能除去的.因为临床活检不可能有这么长的时间来冲洗组织.因此要特别指出的是,在其后的各种技术操作中,要特别注意到甲醛的存在,必须要想办法除去它,否则将会给各种染色造成影响,甚至导致失败.
应用甲醛,可以配成许多种固定液:
1.10%缓冲福尔马林固定液
甲醛 100ml
蒸馏水 900ml
NaH2PO4·H2O 4g
Na2HPO4 (无水) 6.5g
该固定液是当今流行的固定液,因它对组织固定较好,损伤较少,因对其后的各方面的研究都较好,尤其是对免疫组化的染色.
2、10%福尔马林固定液
甲醛100 ml
自来水900ml
这是一种最简单的固定液,适合于边远地区携带的固定液,但由于它的单一性,因此,只要有条件的单位都不要求使用这种固定液。
3、10%福尔马林盐固定液
甲醛100 ml
自来水900ml
Nacl9克
先将Nacl溶于水,再加入甲醛。这也是一种较为简单的固定液,但由于加入Nacl,它是一种重金属盐物质,加入了它可促进和改善染色,增加染色的强度。
4、Bouin氏固定液
苦味酸饱和水溶液75 ml
甲醛2 ml
冰醋酸5 ml
该固定液中的冰醋酸,对胶原纤维等组织有膨胀作用。而甲醛对组织有收缩作用。两种试剂的混合使用,用以抵消彼此间的副作用。使组织固定达到优良的固定水平。
5.醛糖钙固定液
甲醛100ml
蔗糖300ml
乙酸钙20g
蒸镏水90ml
先将蔗糖和乙酸钙溶于蒸镏水,后加入甲醛。该固定液对于做酶的组织化学的研究效果较好,组织固定后,做冰冻切片,再给予显示。
当前国内外基本上都还是要用甲醛来固定组织。从免疫组织化学的角度来说,甲醛固定的组织大部分都可以用免疫组化的手段来检测,据多人认为,它对lgA ,lgM,J链,K链和λ链的标记效果较好,且背景清晰。但美中不足的是:经它固定的组织,可与蛋白形成醛交联蛋白,这种醛键可封闭抗原。固此,在免疫组化实际检测中,应根据不同的要求和需要,采用酶消化或者其它抗原修复如微波、高压等的方法,以便破坏醛键重新暴露抗原。
(2)酒精:又称乙醇,为无色透明的液体,沸点是78度,工业酒精是95%。
酒精它有许多优点:
1.可保存尿酸结晶和糖原等物质。高浓度的酒精如95%,无水酒精可保存上述两种物质,因它们易溶于水,因此,要证明上述两种物质的存在,就不能用含水的固定液来固定组织。
2.能在任何比例的情况下与水混合,在病理技术中,酒精是一种十分重要的试剂,它起着关键的作用。如果没有酒精,将会无法完成必要的工作。如组织的脱水,切片染色前后都离不开酒精,在常规的工作中,通常都用95%的工业酒精来配成60%、70%、80%、90%等不同的浓度来使用。
3.可溶解苯类物质为染色步骤中的桥梁试剂。常规活检等切片上的石蜡必须除去,才能进行染色,能除去石蜡的物质有苯及汽油等,常用的有苯类试剂,苯不溶于水,但能溶于酒精,酒精在这里充担着除去苯和连接水的作用,为切片入水架起了桥梁,因此称它为桥梁试剂。
4.能除去切片上的水份,使切片无水化。切片经染色后,由于所用的试剂都为水溶液,因此在切片上含有大量的水份,这些水份经系列梯度酒精的置换吸附后,到无水酒精中已完全无水,这样处理对于切片的保存是有好处的,否则,切片将会褪色。


