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酶的性质实验—激动剂和抑制剂对酶活力的影响
作者:未知 来源:沈阳药科大学 时间:2006-8-8
    【实验原理】
    许多物质能影响酶的催化活性,能加速酶的催化作用的物质称为激动剂,能抑制酶的催化作用的物质称为抑制剂。本实验分别考察MnCl2和HgCl2对碱性蛋白酶的激动和抑制作用。

    【实验材料】
      1. 实验器材
    试管及试管架;漏斗及滤纸;恒温水浴锅;温度计;移液管;721分光光度计
      2. 实验试剂
      ⑴ 1% 酪蛋白溶液:同酶特异性实验
      ⑵ 1/2000碱性蛋白酶溶液:同酶特异性实验
      ⑶ pH10 硼砂氢氧化钠缓冲液: 同酶特异性实验
      ⑷ 8×10-3 M MnCl2溶液
      ⑸8×10-3M HgCl2溶液 
      (6) 0.4 mol/L碳酸钠溶液
      ⑺ 0.4 mol/L三氯醋酸溶液
      ⑻ 福林试剂: 同酶的特异性实验

    【实验操作】
      取三支试管, 按下表加入试剂:

                   

    试剂

    试管编号

    1

    2

    3

    1% 酪蛋白溶液(ml)

    1.0

    1.0

    1.0

    pH10 缓冲液(ml)

    1.0

    1.0

    1.0

    8×10-3M MnCl2 溶液(ml)

    1.0

    8×10-3M HgCl2 溶液(ml)

    1.0

    蒸馏水(ml)

    1.0

    1/2000碱性蛋白酶溶液(ml)

    1.0

    1.0

    1.0

    实验结果

     

     

     

    混合均匀后,于40℃水浴中保温15分钟. 然后每管各加入0.4M 三氯醋酸溶液3.0ml,分别过滤,各吸取滤液1.0ml,加0.4M碳酸钠溶液5.0ml,福林试剂1.0ml,摇匀,于40℃水浴保温15分钟。显色后用721型分光光度计,在波长680nm处测定光密度(比色时,以蒸馏水作空白)并记录。

    【注意事项】
      1.每个人的唾液淀粉酶活性并不相同,有时差别很大,因此稀释倍数可因个人情况而定。
      2.少量的激动激或抑制剂就能影响酶的活性。但激动剂和抑制剂不是绝对的,有些物质在低浓度时为某种酶的激动剂,而在高浓度时则为该酶的抑制剂。对一种酶是激动剂,对另一种酶是抑制剂。
      3.反应时间要准确,做酶学实验所用的器皿必需洁净、干燥,定量准确。

    【思考题】
      1.什么是酶的最适温度、最适pH值?有何实际意义?
      2.影响酶的催化活性的因素有哪些?简要说明作用原理。
         3.酶学实验必须注意控制哪些条件?为什么?
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