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酶的性质实验—pH对酶活力的影响
作者:未知 来源:沈阳药科大学 时间:2006-8-8

    【实验原理】
        酶活力受环境pH的影响,在一定pH下,酶表现最大活力,高于或低于此pH,酶活力降低,通常把表现出酶最大活力的pH称为该酶的最适pH。pH影响酶活力的主要原因有以下几个方面,首先,pH影响酶分子活性部位上有关基团的解离,另外,也影响底物的解离状态,从而影响酶活性中心与底物的结合或催化。其次,有关基团解离状态的改变影响酶的空间构象,甚至会使酶变性。尽管有一些酶能忍受较大的pH的变化,但大多数酶保持活性的pH值范围很窄。正因如此,生物体使用缓冲液调节体内的适宜pH值。

    【实验材料】
    1. 实验器材
    试管及试管架;漏斗及滤纸;恒温水浴锅;温度计;移液管
    2. 实验试剂
    ⑴ 1% 酪蛋白溶液:同酶的特异性实验
    ⑵ 1/2000碱性蛋白酶溶液:同酶的特异性实验
    ⑶ pH10 硼砂氢氧化钠缓冲液: 同酶的特异性实验
    ⑷ 0.1mol/L盐酸
    ⑸ 0.2 mol/L 氢氧化钠溶液
    ⑹ 0.4 mol/L碳酸钠溶液
    ⑺ 0.4 mol/L三氯醋酸溶液
    ⑻ 福林试剂: 同的酶特异性实验

    【实验操作】
      取三支试管, 按下表加入试剂:

                

    试剂

    试管编号

    1

    2

    3

    1% 酪蛋白溶液(ml)

    1.0

    1.0

    1.0

    pH10 缓冲液(ml)

    1.0

    0.1M HCl(ml)

    1.0

    0.2M NaOH 溶液(ml)

    1.0

    1/2000碱性蛋白酶溶液(ml)

    1.0

    1.0

    1.0

    实验现象

     

     

     

    混合均匀后,于40℃水浴中保温15分钟。 然后每管各加入0.4M 三氯醋酸溶液3.0ml,分别过滤,各吸取滤液1.0ml,加0.4M碳酸钠溶液5.0ml,福林试剂1.0ml,摇匀,于40℃水浴保温15分钟,观察现象,比较在不同pH下,碱性蛋白酶活力的大小。
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